【摘 要】
：
近年来,昆虫RNA干扰（RNAi）技术的研究取得了空前的发展,基于RNAi的害虫防治方法受到广泛关注。目前制约dsRNA在害虫防治中的应用的主要因素是高效低成本的dsRNA合成方法和dsRNA的安全性风险。基于此,本论文首先利用CiteSpace软件分析总结了全球昆虫RNAi的研究热点,确定了以赤拟谷盗作为研究对象,建立了大肠杆菌表达dsRNA饲喂赤拟谷盗的方法,筛选到对赤拟谷盗具有防控效果的ds
【基金项目】
：
转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08011-01）；
论文部分内容阅读
近年来,昆虫RNA干扰（RNAi）技术的研究取得了空前的发展,基于RNAi的害虫防治方法受到广泛关注。目前制约dsRNA在害虫防治中的应用的主要因素是高效低成本的dsRNA合成方法和dsRNA的安全性风险。基于此,本论文首先利用CiteSpace软件分析总结了全球昆虫RNAi的研究热点,确定了以赤拟谷盗作为研究对象,建立了大肠杆菌表达dsRNA饲喂赤拟谷盗的方法,筛选到对赤拟谷盗具有防控效果的dsRNA片段,并评价了其非靶标效应,以期为为赤拟谷盗RNAi的非靶标效应评价提供一定的数据基础,为dsRNA在害虫防治中的安全应用提供理论依据。本论文主要结果如下:1.细菌表达的赤拟谷盗防控基因dsRNA的筛选对赤拟谷盗四个候选基因dsRNA构建了重组表达载体,并成功地使靶标基因的dsRNA在大肠杆菌HT115（DE3）中表达。以大肠杆菌RNA粗提液混合饲料饲喂赤拟谷盗幼虫,发现dsTcCht10和dsTc VATP-C对赤拟谷盗幼虫的存活率和基因转录水平均有显著影响。对dsTcCht10进行了浓度梯度测试,其致死中浓度LC50为105.5 ng/mg,该dsRNA片段在赤拟谷盗防控中具有一定的应用价值。2.dsTcCht10饲喂后赤拟谷盗转录组的分析通过转录组测序的方法,分析了赤拟谷盗dsTcCht10饲喂后其基因表达的情况。结果表明,有效沉默TcCht10后,除了TcCht10表达量明显下降,与表皮相关的其余52个基因表达量也显著变化。此外,dsTcCht10也可能会对赤拟谷盗其他非靶标基因的转录水平造成影响,今后可以结合降解组等测序方式并基于全基因组进行深入分析和验证,以更好了解dsRNA或者siRNA的脱靶效应。3.dsTcCht10对两种非靶标生物影响的评价将不同浓度的dsTcCht10饲喂两种非靶标生物丽蝇蛹集金小蜂和麦蛾柔茧蜂,以非靶标生物同源基因的dsRNA作为阴性对照。结果表明,dsTcCht10饲喂对这两种非靶标生物的存活率都无显著影响,但是1000 ng/μL的dsTcCht10对丽蝇蛹集金小蜂Cht10基因转录水平有显著影响,这可能与dsTcCht10片段与丽蝇蛹集金小蜂同源基因的序列相似性有关,赤拟谷盗dsTcCht10与丽蝇蛹集金小蜂同源基因的相似性为66.75%,且存在连续19-23nt核苷酸的匹配个数。
其他文献
褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）是极具破坏性的水稻害虫。铁蛋白广泛存在于真核细胞生物中,对生物的生长发育具有重要作用。本研究对褐飞虱铁蛋白基因进行了功能研究,为褐飞虱防控提供了新思路。本论文鉴定了三个褐飞虱铁蛋白基因,即NlFer1、NlFer2和Nlsoma-Fer。通过RNA干扰（RNAi）技术,探究了NlFer1、NlFer2和Nlsoma-Fer对褐飞虱生长发育以及
昆虫神经肽是由神经系统合成、贮存并释放的多肽类活性物质,是多细胞生物中最多样的信号分子群。成熟肽（通常约5–80 aa）是由无活性的前体肽产生的,具有含量低、活性高、作用广泛且复杂的特点,影响昆虫几乎所有的行为和生理反应。咽侧体抑制激素Alloatostatin-A（AST-A）在昆虫中分布广泛,存在于脑、咽侧体、血淋巴、消化道及神经节中。目前研究发现,昆虫AST-A具有影响昆虫的保幼激素合成、α
烟粉虱Bemisia tabaci（Hemiptera:Aleyrodidae）是世界范围内广泛分布的重要农业害虫。烟粉虱是一个包含至少44个隐存种的物种复合体,其中两个全球入侵种Middle East-Asia Minor 1（MEAM1）和Mediterranean（MED）危害尤其严重。烟粉虱抗药性的增强以及人们环境保护意识和食品安全意识的提高,使得烟粉虱的物理防治和生物防治等非化学防治方法
铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是我国久享盛誉的传统道地药材,近年来其病害日益严重。本课题组在浙江铁皮石斛种植基地发现一种茎基部腐烂病,本文分离了该病的病原菌、并研究了铁皮石斛内生拮抗菌的抑菌效果、拮抗机制以及促生机理,具体结果如下:1、对铁皮石斛茎腐病感病植株进行病原菌的分离,得到4株真菌,发现菌株A-612具有致病性。根据菌落、菌丝特征及rD
烟粉虱Bemisia tabaci（Gennadius）是一个包含数十个隐存种的复合群,其中MEAM1烟粉虱因具有快速扩散及对本地种烟粉虱取代的能力,而成为危害我国农业生产的主要害虫之一。烟粉虱利用刺吸式口器刺入寄主植物的维管束,吸取汁液,从而影响植物生长。在长期进化中,植物形成了一套可遗传的抗性机制来应对外界不良因素的干扰。其中次生代谢产物和防御蛋白是许多防御反应的重要组成部分。这些化学物质的合
烟碱型乙酰胆碱受体（Nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs）是昆虫中枢神经系统主要的兴奋性受体,也是几类重要杀虫剂的靶标,例如:新烟碱类杀虫剂（Neonicotinoids）。在模式生物黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）体内编码nAChR亚基的基因有10种,包括Dα1-7和Dβ1-3。昆虫nAChR是由这些亚基组成的五聚体跨膜蛋白,
昆虫病原真菌对宿主的入侵是一个非常复杂的过程,正常情况下,宿主微生物群在宿主体内维持着动态的生态平衡。一旦昆虫病原真菌入侵,宿主内微生态平衡会被打破,宿主-病原真菌-宿主微生物群落三者间会发生复杂的相互作用。现阶段,昆虫病原真菌与宿主之间的互作已进行了大量研究,但对昆虫病原真菌与宿主微生物群落互作的认识还非常有限。发现并阐明昆虫病原真菌与宿主微生物群落之间的互作模式对全面认识昆虫病原真菌的致病机制
稻曲病是稻曲病菌Villosiclava virens特异性侵染水稻花丝而引起的真菌病害。近年来,随着超级稻和杂交水稻的大面积种植,稻曲病从一个轻微病害逐渐发展成为一个水稻主要病害。稻曲病不仅会导致水稻减产,稻曲球含有的稻曲毒素也严重影响稻米的食用安全。近年来,稻曲病菌菌核已经被证明是稻曲病发生的一个重要初侵染源。因此,进一步明确菌核的越冬行为及筛选对其具有降解作用的生防菌将对稻曲病的综合防控具有
毒氟磷是我国创制的植物免疫诱导抗病毒剂,具有高效、低毒等特点,能有效防治烟草、番茄、黄瓜病毒病以及南方水稻黑条矮缩病等多种植物病害,市场前景良好。近年来国内外已有关于毒氟磷在环境体系中的残留研究,但农药在进行登记和安全性评价时,必须提供其代谢产物的相关信息,然而目前对毒氟磷在植物体内代谢的相关研究尚未完全开展。因此,研究毒氟磷在植物中的代谢规律对其安全性评价及残留定义具有重要的现实意义。根据《农作
PCDH7属于钙黏蛋白最大的亚家族PCDH家族,按照基因的分布,钙黏蛋白PCDH家族大体分为两类:簇状和非簇状PCDHs。非簇状PCDH家族又分为δ1、δ2和ε亚群。PCDH7属于δ1亚群,有保守的CM1和CM2结构域,除此之外,还具有蛋白磷酸酶-1α（PP1α）结合结构域（CM3）。研究表明PCDH7在多种肿瘤细胞中存在异常表达,并且在不同肿瘤细胞中表现着相反的功能。目前有关PCDH7影响肿瘤发