【摘 要】
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目的通过经3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的脂肪细胞与成纤维细胞的混合培养,分析比较脂肪细胞是否能够抑制成纤维细胞的增殖及胶原合成,并分析和比较脂肪细胞本身的变化。方法:
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目的通过经3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的脂肪细胞与成纤维细胞的混合培养,分析比较脂肪细胞是否能够抑制成纤维细胞的增殖及胶原合成,并分析和比较脂肪细胞本身的变化。方法: 3T3-L1前脂肪细胞的培养和诱导分化;成纤维细胞的分离培养,实验取第4~6代细胞进行。实验分三组,AF组:脂肪细胞与成纤维细胞混合培养组;A组:单纯脂肪细胞培养组;F组:单纯成纤维细胞培养组。每组各实验均测3个数值,取平均值。细胞形态学观察:将细胞分别于原代培养的成纤维细胞传代48小时后、3T3-L1接种时、3T3-L1诱导分化第8天、诱导分化油红0染色后在倒置相差显微镜下直接观察细胞的形态并摄像。细胞计数及生长曲线的绘制:取生长状况良好的对数生长期细胞制成单细胞悬液,分3组接种,AF组:分别将脂肪细胞和成纤维细胞以1×105/2ml培养液接种于25ml,底面积为12cm2培养瓶内,每组3瓶;A组:将脂肪细胞以1×105/4ml培养液接种于上述培养瓶内,每组3瓶;F组:将成纤维细胞以1×105/4ml培养液接种于上述培养瓶内,每组3瓶。连续培养12天,每天均取3瓶细胞行苔盼蓝染色排除法活细胞计数,其中AF组采用密度梯度离心,Percoll细胞分离液分离细胞,倒置相差显微镜下观测脂肪细胞及成纤维细胞的百分比,计算纯度后计数,每瓶重复计数三次,取平均值,绘制生长曲线。胶原合成的测定:取生长状况良好的对数生长期细胞制成单细胞悬液,分两组接种:AF组:分别将脂肪细胞和成纤维细胞以1×104
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