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知母(Anemarrhenae Rhizoma)为百合科植物知母（Anemarrhenaasphodeloides Bge.）的干燥根茎，具有清热泻火、生津润燥之功效。药理研究表明，知母具有抗炎、抗菌、抗血小板凝集等作用，尤其在治疗风湿、糖尿病方面疗效显著。知母的化学成分以甾体皂苷类化合物和黄酮类化合物为主，此外还含有苯丙素类、生物碱类、有机酸类等化合物。本文利用90%乙醇提取、硅胶及ODS柱层析、重结晶等手段从知母干燥根茎中分离出10个单体化合物，利用NMR、MS等波谱学手段鉴定了其中9个化合物的结构，它们分别是：单甲基-顺-扁柏树脂酚、2,6,4’-三羟基-4-甲氧基二苯甲酮、蜡菊亭、牡荆素、知母皂苷AⅣ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅠ、芒果苷，其中蜡菊亭是首次从知母中分离得到。本文还建立了知母中知母皂苷AⅣ的HPLC-ELSD含量测定方法。另外，还对从知母中分离得到的10个单体化合物及知母的不同提取物的DPP-Ⅳ活性抑制作用进行了研究。一、知母化学成分的提取、分离和结构鉴定1.1、提取将干燥知母根茎30kg粉碎，以90%乙醇回流提取3次,每次1h，90%乙醇用量均为10倍(V/W)，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到粗提物2.5kg。1.2、分离及纯化将2.5kg粗提物进行硅胶柱层析分离，以乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱液进行梯度洗脱，得到A、B、C、D四个部分。将A部分以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱液进行硅胶柱层析分离，得到A1～A5四个组分。将A1组分进行ODS柱层析，以乙醇-水为洗脱液，再经重结晶，得到化合物zm-1单体100mg。A2组分以乙醇-水为洗脱液，经ODS柱层析分离，得到化合物zm-2单体100mg、化合物zm-3单体40mg。A4组分经多次洗涤，最后经重结晶得到化合物zm-4单体30mg。A5组分以乙醇-水为洗脱液，经ODS柱层析和重结晶，得到化合物zm-5单体100mg。B部分分别经硅胶柱层析（乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱剂）、ODS柱层析（乙醇-水为洗脱剂）及重结晶，得到化合物zm-6单体100mg。C部分分别经硅胶柱层析（乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱剂）、ODS柱层析（丙酮-水为洗脱剂）及重结晶，得到化合物zm-7单体100mg、化合物zm-8单体80mg、化合物zm-10单体40mg。D部分经重结晶得到化合物zm-9单体150mg。1.3结构鉴定利用核磁、质谱等波谱学手段并与文献对照，共鉴定了9个化合物的结构，它们分别是：单甲基-顺-扁柏树脂酚(zm-1)、2,6,4’-三羟基-4-甲氧基二苯甲酮(zm-2)、蜡菊亭(zm-3)、牡荆素(zm-4)、知母皂苷AⅣ(zm-5)、知母皂苷Ⅰ(zm-6)、知母皂苷BⅢ(zm-7)、知母皂苷AⅠ(zm-8)、芒果苷(zm-9)。二、HPLC-ELSD法测定知母中知母皂苷AⅣ（zm-5）的含量2.1仪器和色谱条件Agilent1200高效液相色谱仪；Unitary C18100（4.6×250mm,5μm）色谱柱；Alltech2000蒸发光散射检测器。色谱条件为：流动相：乙腈-0.1%乙酸（43:57）；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；漂移管温度：101℃；气体压力：2.15bar；撞击器：关闭。2.2方法学考察2.2.1线性关系在进样量为0.6μg～30μg范围内，化合物zm-5的峰面积的对数lgS与进样量的对数lgm呈良好的线性关系。线性方程为：y=1.358x+1.211，R2=0.9990。2.2.2精密度化合物zm-5的日内和日间峰面积的RSD值分别为1.22%和1.33%，表明仪器精密度良好。2.2.3重复性测定6份供试品溶液，化合物zm-5含量的RSD值为1.47%，表明重复性良好。2.2.4稳定性供试品溶液在0～10h内每隔2h测定一次，结果化合物zm-5峰面积的RSD值为1.24%，说明供试品溶液在10h内稳定性良好。2.2.5加样回收率化合物zm-5的平均加样回收率为97.01%，RSD值为1.09%，说明回收率良好。2.3含量测定本文测定了不同产地的知母中化合物zm-5（知母皂苷AⅣ）的含量，结果表明不同产地含量差异显著。其中购自河北安国的第3批知母药材中知母皂苷AⅣ的含量最高，为0.643%；第一批知母药材中知母皂苷AⅣ的含量最低，为0.028%。三、DPP-Ⅳ活性抑制试验本文对从知母中分离得到的10个单体化合物及知母的各种提取物进行了DPP-Ⅳ活性抑制试验。结果表明，化合物单甲基-顺-扁柏树脂酚对DPP-Ⅳ的抑制率达到30%，其余成分均对DPP-Ⅳ无抑制作用。四、总结本论文在国内外学者的研究基础上，对知母的化学成分进行了深入研究，共分离出10个单体化合物，鉴定了其中9个化合物，其中1个为首次从知母中分离得到。本文建立了知母中知母皂苷AⅣ的HPLC-ELSD的含量测定方法。此外，本文还对10个单体化合物及知母药材提取物的DPP-Ⅳ酶活性抑制作用进行了研究。本论文的研究结果对知母的开发利用提供了新的科学依据。