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前言 采用密度梯度超速离心、梯度凝胶电泳把LDL分成两大亚组份：大而轻LDL（A型）和小而密LDL（B型）。以B型为主的LDL因易于氧化被国内外众多学者认为是动脉粥样硬化发生的强危险因素。动脉粥样硬化是动脉粥样硬化性脑梗死（ACI）的病理生理基础。有关LDL颗粒直径与ACI的关系尚未有报道。本文对ACI患者及正常人LDL颗粒直径及电泳图形进行分析，探讨ACI与B型LDL之间的关系。 资料和方法 一、研究对象 实验组为32例ACI患者，男性23例，女性9例，均为我院2001年1月-12月入院的患者，符合第四届全国脑血管疾病会议制定的标准，经头CT、MRI诊断证实。排除心、肝、胆、胰、肾、糖尿病等疾病。年龄31-79岁，平均60.09±12.63岁，对照组为健康体检者32例，男性21例，女性11例，年龄40-77岁，平均49.50±7.16岁。 二、实验方法 1．标本的采集和制备 空腹12小时晨起后抽取肘静脉血8ml，5ml加EDTA-Na2（1g／L）抗凝全血，离心（3000rpm／min，10min）后分离血浆，-70℃冰冻保存。另3ml全血分离血清，测定血清脂质及载脂蛋白。 2．低密度脂蛋白的分离 采用梯度密度超速离心法。取0．grnl血浆，加人澳化钾（KBr）0．35659调密度为 1．400KgiL，加人 l．11KgiL的 KBr溶液1．snd，1．006Kg／L生理盐水9．3Inl。精密天平配平后，放人离心机转子中。设置上升时间为8分钟，下降时间为8分钟，HITACHI（日立）SCP85H型超速离心机超速高。G’（6s000rp叫5．sh。 超速离心后，在管的中下部可见一条密集的淡黄色带，为要分离的低密度脂蛋白带。用10Inl注射器插人LDL带，缓缓吸出LDL大约Znd，放人带盖微量离心管中为LDL提取液。将LDL提取液放人透析袋中，置于3L透析液瞩H7．4 0．001。OUL磷酸缓冲液刀．16一oVL NaCI、10卜moVL EDTATA）中，4℃透析24h后浓缩，为LDL浓缩液。 3．聚丙烯酸胺凝胶电泳 2．5％－16％丙烯酸胺溶液灌人梯度发生器中，接仪器操作步骤灌入小垂直板中，形成2．5％－16％聚丙烯酸胺梯度凝胶，灌胶时间为 2－3分钟，聚合一小时后放人电泳仪中，预电泳 150V（电泳缓冲液为 IX TBE缓冲液人加人 LDL浓缩液及参考标准液15…，依次于70V电泳lh；150V电泳24h，电泳温度4℃。电泳后用考马斯亮兰过夜染色，脱色液脱色5－6h。用密度扫描仪（600run）扫描，测量主峰的泳动距离。参考标准含过氧化物酶（10．4run），乳酸脱氢酶（8．lrun），白蛋白门．Inm）。以参考样品的泳动距离为横坐标，颗粒直径的对数值为纵坐标绘制标准曲线，计算LDL颗粒直径及面积。 4．低密度脂蛋白亚组份图形确定 低密度脂蛋白亚组份图形分为A型和B型。A型指以颗粒直径大于或等于 25．5 urn的 LDL为主峰，较小颗粒为次峰出型指以颗粒直径小于25．sum的LDL为主峰，较大的颗粒为次峰。 5．血脂和载脂蛋白的测定 酶法测定血浆总胆固醇门C)和甘油三酯(T人高密度脂蛋 ·2·白胆固醇（HDL－C入低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C八载脂蛋白B。 6．统计学方法 数据以均数。标准差k。S）表示，数据处理采用t检验，X’检验及相关分析。 结 果 1．脑梗死组与对照组血脂及载脂蛋白水平比较 脑梗死组TC、TG人DL－C及载脂蛋白 B较对照组明显升高瞻＜0．of人 2．低密度脂蛋白颗粒直径及分布 ACI组及对照组血浆LDL颗粒平均直径分别为 24．85。0．66urn和 25．98 t 0．63urn，两组结果差异显著瞩＜0．01八＊m组中A型LD L 2例，占12．5畅；B型 14例，占 87．5％。对照组 A型 11例，占 78．57％出型 3例，占21．43％，B型LDL在ACI组所占比例明显高于对照组（X‘＝10．72，P＜0．005）。 3 LDL亚组份结果比较 2 5％－16％梯度凝胶电泳扫描时可见3个峰，迁移最快的为小而密LDL，最慢者为大而轻LDL，中间LDL介于二者之间。由三个波峰面积得出各组分的相对百分含量。J而密LDL含量ACI组为49．70。10．19％，对照组为16．95 t 10．of畅，二者差异有显著意义（t＝8．85，P＜0．001）。中间LDL含量ACI为29．36 L 6．93助，对照组为54．05＊10．02呢，对照组显著高于 ACI组，（t＝8．5，P＜0．001）。 4低密度脂蛋白颗粒平均直径与血浆脂质及载脂蛋白含量之间的关系 相关分析显示人＊L颗粒直径与TG卜一一o．叮，P＜0．of），TC（r＝＊0．51，P＜0．of），LDL－C（r＝－0．36，P＜0．05），apoB（r＝－0．46，P＜0、05）呈负相关。 ·3· 讨 论 Austin等采用密度梯度超速离心、梯度凝胶电泳把LDL分成两大亚组份：一类称大而轻LDL(A型厂以颗粒直径大于或等于25．sum、密度接近互．02g／nil的 LDL颗粒为主；另一类称小而密LDL(B型X以直径小于25．sum、密度接近1．06／Inl的LDL颗粒为主。以B型为主的LDL是动脉粥样硬化（AS）发生的