该研究以美国、海南、云南不同种源引进的绿玉树枝条为材料,建立了扦插和离体快速繁殖体系,在此基础上开展了物理、化学抗寒诱变和多倍诱导等研究.围绕抗寒诱变和新种质的获得,对经不同途径获得的诱变材料进行了乳汁主要化学成分分析、染色体组RAPD分析、电解质的相对外渗率、线粒体和叶绿体超微结构的变化等基础性研究.1、优化了绿玉树扦插繁殖技术,成功建立了绿玉树微型快繁系统:研究插条种源、插条生理成熟度、激素种类和浓度、扦插基质、扦插季节对生根的影响:探讨激素种类、浓度及其它非激素类物质对诱导不同外植体分化、试管苗生根、移栽的影响,筛选出了适宜培养基、培养条件和培养途径. 2、率先探讨抗寒驯化途径:对缀玉树组培苗进行了物理化学诱变及染色体加倍的研究,获得了绿玉树四僧体新种质:探讨了 PP333与CaCl2对提高绿玉树扦插苗抗寒性的影响.对绿玉树试管小苗进行不同剂量的Co<60>-r辐射诱变、EMS化学诱变,秋水仙碱诱导多借体研究,筛选出HYP不敏感植株和多倍体植株,探讨不同物理化学诱变剂对绿玉树诱变的影响.3、初步建立了农杆菌介导绿玉树抗冻蛋白基因转化系统:采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens LBA4404,AFP-P,AFP为0.4kb)共培养介导法进行基因转化,并和辐射处理相结,探索绿玉树遗传转化条件,尝试建立适合于绿玉树抗冷冻蛋白基因转化的转化系统.4、对不同选育材料的主物学特性、及抗寒性进行了比较研究:对来自不同种源和通过物理化学诱变、多倍体诱导及遗传转化途径获得的材料进行形态结构、生长、繁殖继代能等特点和抗寒性的比较研究、探讨了不同供试材料之间的抗寒差异.5对不同种源绿玉树的乳汁成分及不同选育途径获得的诱变材料进行了RAPD分析:(1)利用GC-MS对绿玉树不同种源和海南种源试管苗乳汁的组分进行定性、定量对比分析.(2)10个供试材料进行RAPD分析,14种引物共产生93条带(其中包括58条多态性态)扩增图谱,计算单匹配系数,应用UWPGA方法构建关系树.6、获得绿玉树四倍体新种质四倍体绿玉树表现出较强的抗寒性,为扩大绿玉树在中国的种植有重大价值.7、需要进一步研究解决的问题:(1)建立体细胞胚胎发生途径的离体快繁系统,以便快捷、有效地增殖无性系苗,提高物理、化学诱变率和遗传转化率,降低嵌合突变体的产生.(2)提高试管苗的移栽成活率,使绿玉树离体微型快繁技术可真正应用于生产实践.(3)对已获得的突变体进行扩繁,抗冷冻驯化.(4)进一步探讨影响抗冷冻蛋白基因转化的因素,建立合适的绿玉树遗传化体系,以期获得耐低温、抗冷冻的植株.