本文以中国林蛙皮肤中的brevinin-2CE为研究目标，在其N、C末端分别添加Met，以2倍体串联的方式进行表达，利用大肠杆菌偏爱的密码子将其氨基酸序列逆编码成DNA序列。添加酶切位点后，拟合成序列全长为258bp，利用Genedesign β3.0将其拆分为10条相互重叠16bp、平均长度为45bp的单链寡核苷酸。利用ABI3900DNA自动合成仪采用亚磷酰胺三酯法合成单链寡核苷酸，利用PAGE法纯化合成产物。 利用基于PCR反应的两步法和一步法合成brevinin-2CE基因，反应产物经凝胶回收后，与pET31b质粒进行AlwN I、Xho I的双酶切，经T4连接酶连接后，热激转化，在含有氨苄的培养基上培养过夜，挑单菌落。经IPTG诱导表达的阳性克隆菌液比未经诱导表达的菌液OD600明显降低，表明brevinin-2CE成功表达且具有抑菌活性。挑取2个一步法、2个两步法合成基因的阳性克隆进行测序，与拟合成DNA序列进行比对，合成基因中的碱基错误情况统计果表明，4个测序的阳性克隆，只有W01序列完全正确。W03含有1个碱基错误，W04含有1个碱基错误，W05含有2个碱基错误。四个测序克隆共1024个碱基中，含有4个碱基错误，错误率为3.91‰。 在培养物中加入IPTG（100mM）至终浓度1mM，37℃诱导4h后经SDS-PAGE检测，出现特异性KSI-2CE条带，初步判断融合蛋白已表达。菌体经超声破碎后，包涵体用CNBr切割，产物经Glutathione Sepharose4B凝胶层析纯化抗菌肽，经16.5%Tricine-SDS-PAGE电泳检测，融合蛋白被成功切开为KSI和2CE两个小蛋白。 不同浓度的brevinin-2CE均可对大肠杆菌产生边缘清晰、背景完全透明的抑菌圈，对绿脓杆菌产生边缘较清晰、背景较透明的抑菌圈，对金黄色葡萄球菌产生边缘清晰、背景较深的抑菌圈。抑菌圈的直径与试验所选择的brevinin-2CE浓度无相关性，抑菌圈背景清晰度与brevinin-2CE浓度无相关性。0.2%的brevinin-2CE已经可以完全抑制大肠杆菌的生长，但是1.8%的brevinin-2CE还不足以完全抑制金黄色葡萄球菌的生长，说明brevinin-2CE对不同致病菌的敏感性是不同的。 抗菌肽brevinin-2CE在100mg/L时对K562细胞的增殖有抑制作用,抑制率为25.93%,抑制作用明显弱于阳性对照顺铂。抗菌肽brevinin-2CE在100mg/L时对HCT116细胞的增殖有抑制作用,抑制率为37.04%，抑制作用明显弱于阳性对照顺铂。但对SMMC27721和A549细胞的增殖无明显影响。