中药材蛇胆来源复杂,缺乏统一的完善的质量标准,导致蛇胆使用混乱,掺伪现象严重,质量参差不齐。本文在前期研究基础上,拟对规范蛇胆来源、控制蛇胆掺伪、提高蛇胆药材标准质量进行研究,为多指标,专属性强的蛇胆中药材质量控制方法提供依据。采用UPLC技术,分别建立了黑眉锦蛇、王锦蛇、乌梢蛇、灰鼠蛇、赤链蛇、银环蛇、五步蛇、眼镜蛇、金环蛇等3科9种蛇胆、混合蛇胆及猪、牛、羊、鸭等常见掺伪动物胆的UPLC特征图谱;根据相似度评价系统,匹配共有特征峰,计算相似度。9种蛇胆特征图谱差异较大;10批混合蛇胆标定7个共有峰,相似度较高。蛇胆与掺伪动物胆的相似度分析表明,蛇胆与掺伪动物胆相似度低,能有效区分。对于蛇胆中掺加少量伪品胆汁的情况,也建立了控制方法。采用Waters UPLC/Qtof-MS/MS技术对蛇胆常见掺伪动物胆,如鸡胆、鸭胆、牛胆、羊胆、猪胆以及兔胆汁酸进行定性分析。鉴定了鸡、鸭胆各3种牛磺结合型胆酸;鉴定出猪胆中8种胆汁酸,包括5种甘氨结合型胆酸,3种牛磺结合型胆酸;牛胆中6种胆汁酸,包括3种牛磺结合型胆酸和3种甘氨结合型胆酸,羊胆中8种胆汁酸,包括4种牛磺结合型胆酸、3种甘氨结合型胆酸和胆酸;兔胆中7种胆汁酸成分,包括5种甘氨结合型胆酸,1种牛磺结合型胆酸,1种甘氨酰牛磺结合型胆酸。采用ABsciex 4500 UPLC-QqQ-MS/MS,测定了猪、牛、羊、鸡、鸭5种21批常见掺伪动物胆中牛磺胆酸(TCA)、甘氨胆酸(GCA)、甘氨猪去氧胆酸(GHDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、甘氨鹅去氧胆酸(GCDCA)、甘氨去氧胆酸(GDCA)、胆酸(CA)8种主要胆汁酸含量。根据2015年版《中国药典》对中药材标准正文收载内容要求,对蛇胆的来源、性状、薄层鉴别、检查及主要有效成分牛磺胆酸的含量测定等方面进行了质量标准研究。确定了蛇胆的来源及性状特征;在蛇胆薄层鉴别中,采用普通硅胶G板,以牛磺胆酸钠与蛇胆汁为对照,主产地蛇胆及商品蛇胆均显示牛磺胆酸钠主斑点,与对照药材有三个以上相同斑点,同时在牛磺胆酸钠斑点下方均出现两个相同颜色的斑点。建立猪牛羊胆的薄层检查:限定甘氨胆酸的量,要求供试品色谱图中,甘氨胆酸斑点颜色不得深于甘氨胆酸对照品斑点,以检查牛羊胆,实验证明在添加10%牛羊胆时,供试品斑点颜色明显深于对照品斑点;以结合型胆酸甘氨猪去氧胆酸为对照品来检测猪胆,实验证明掺假2%猪胆时,即可检出。建立异嗅检查,要求蛇胆不得有柴油等异味。HPLC-UV法测定主要成分牛磺胆酸含量,方法学考察结果良好,并且分别测定了26批自行采集蛇胆样品与26批商品蛇胆的含量。本文阐明了蛇胆与掺伪动物胆汁酸成分的区别,建立了不同蛇胆、混合蛇胆与常见掺伪动物胆的UPLC特征图谱,能快速鉴定并区分蛇胆及掺伪品;建立了专属性与实用性强的蛇胆药材质量标准。对于规范蛇胆来源、控制蛇胆掺伪、保证蛇胆药材质量具有重要意义。