论文部分内容阅读
目的:研究嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）的培养液对正常及损伤大鼠脊髓神经元的影响,进一步探讨OECs促进及保护脊髓神经元的作用机制。方法:取成年SD大鼠分离制备OECs,对OECs行低亲和力神经生长因子受体抗体（ rabbit-anti-rat low-affinity nerve growth factor receptor p75,NGFRp75）细胞免疫组织化学鉴定,并制备嗅鞘细胞培养液（olfactory ensheathing cell culture medium,OECCM）;取孕15～17 d SD大鼠制备胚胎SD大鼠脊髓神经元;以双氧水（H2O2）制备大鼠脊髓神经元损伤模型。实验分两组:（1）对照组（DMEM/F12完全培养基,A组）和OECCM组（B组）分别作用于正常脊髓神经元,观察分析这两组脊髓神经元生长指标及细胞活性的差异;（2）对照组（DMEM/F12完全培养基,C组）和OECCM组（D组）分别作用于经H2O2致伤的脊髓神经元,观察其细胞活性的差异。结果:OECs培养6～9 d后,细胞大多呈双极形或梭形;正常脊髓神经元胞体较大,多成圆形,培养5～7d后,突起明显生长,多为双突起。NGFRP75细胞免疫组化示OECs细胞膜棕色深染,胞体清晰,呈梭性或三角形,OECs培养纯度> 80%。（1）正常脊髓神经元培养6～9 d后,分别加入DMEM/F12完全培养基（对照组,A组）及OECCM（实验组,B组）培养3天,分别测量两组细胞胞体平均直径、单个神经元突起数目、细胞突起长度及MTT比色A值,对照组（A组）为（33.38±6.80）D/μm、（1.67±0.80）个和（91.19±62.64）L/μm、0.402 0±0.586 9;OECCM组（B组）为（37.39±7.28）D/μm、（1.76±0.82）个、（121.33±81.13）L/μm、0.466 0±0.479 0。两组比较差异有统计学意义（P<0.05、P<0.01）。（2）以H2O2制备脊髓神经元损伤模型,损伤后2 h见,神经元数量明显减少、胞体皱缩,细胞突起明显回缩或断裂。分别加入DMEM/F12完全培养基（对照组,C组）及OECCM（实验组,D组）培养3天,分别检测两组MTT比色A值,对照组（C组）为0.149 0±0.030 0; OECCM组（D组）为0.184 0±0.052 0,两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论:OECs培养液可促进正常脊髓神经元生长,对损伤脊髓神经元起到一定程度的保护作用,OECs分泌的促神经生长因子是OECs发挥脊髓神经元保护作用的机制之一。