近年来家蚕丝素由于其独特的理化性能已经被广泛研究作为组织修复用生物材料。柞蚕丝素蛋白则含有较多的对哺乳动物细胞有特异性相互作用的RGD序列,有望在作为细胞培养基质、伤口覆盖膜、人造皮肤及组织工程支架材料和生物医用材料改性等方面有比家蚕丝素更好的效果和应用前景。本文对再生柞蚕/家蚕丝素共混多孔材料的理化性能、柞蚕/家蚕丝素材料的细胞相容性以及EDC交联柞蚕丝素多孔材料对SD大鼠背部真皮缺损的修复作用进行研究。用1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和吗啉—乙磺酸(MES)对柞蚕/家蚕丝素共混溶液进行交联,柞蚕/家蚕的共混比例为:100/0、80/20、60/40、40/60、20/80、0/100,并在不同温度条件下(-80 oC、-60 oC、-40 oC、-20 oC)冷冻,最后经真空干燥制得多孔材料。用X-射线衍射、红外光谱等手段研究了共混比例和交联剂对多孔材料内丝素蛋白结构的影响,结果表明随着家蚕丝素所占比例的增加,共混材料中无规卷曲和α-螺旋结构的含量降低,而柞蚕/家蚕丝素共混多孔材料添加了交联剂后α-螺旋结构的含量增加,结构更加规整。用热分析的手段研究了不同丝素比例的共混材料的热稳定性,结果表明柞蚕丝素所占比例越高,共混材料的热稳定性越好,交联后的多孔材料的热稳定性优于未交联的。本文还研究冷冻温度对柞蚕/家蚕丝素共混多孔材料的压缩率、吸水率、热水溶失率和孔径、孔密度的影响。结果表明在冷冻温度相同的情况下,家蚕丝素所占比例较高的共混材料比柞蚕丝素所占比例高的压缩率小,热水溶失率小,吸水率小;而柞蚕/家蚕丝素比例一定的情况下,冷冻温度越高,共混材料的压缩率越大,吸水率越大,热水溶失率也越大。柞蚕/家蚕丝素多孔材料的孔径随着家蚕丝素所占比例的增加和冷冻温度的降低而减小,孔密度随着家蚕丝素所占比例的增加和冷冻温度的降低而增大。通过体外细胞培养,研究了L929细胞在柞蚕/家蚕丝素材料上的生长情况、活力和形态,细胞形态观察和MTT比色法的结果表明细胞种植天数相同的情况下,柞蚕丝素膜上细胞的活力大于家蚕丝素膜和胶原对照组,而柞蚕/家蚕共混丝素膜上的细胞活力基本介于柞蚕丝素膜和家蚕丝素膜之间。共聚焦显微镜观察结果表明L929细胞在EDC交联柞蚕丝素多孔材料上增殖情况远远好于PVA海绵。在细胞接种密度相同时,相同柞蚕/家蚕丝素比例的共混多孔材料上测得的细胞MTT值均大于对应丝素膜。在SD大鼠真皮缺损部位植入柞蚕丝素多孔材料、家蚕丝素多孔材料和PVA海绵,在植入后第5,10,15,25天分别取材料植入部位及附近组织标本,进行HE染色观察其炎症反应、新生毛细血管数量、材料与新生组织的融合情况和新生组织的形态,并观察PCNA、α-SMA、Collagen I、Collagen III、TGF-β、VEGF、bFGF和CD90各项因子表达的免疫组化情况,结果表明柞蚕丝素多孔材料和家蚕丝素多孔材料炎症反应轻微,能够支持大鼠真皮组织的再生,10天时在多孔材料与组织的交界处就有较丰富的新生毛细血管,随着时间的延长新生毛细血管的数量也增加。