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猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）感染引起的一种猪的重大烈性传染性疾病,具有高传染性和高致病性的特点,给世界养猪业带来了重大的经济损失。猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染引起的急性肠道传染病,临床特征主要为呕吐、腹泻、脱水和哺乳仔猪高死亡率,严重抑制畜牧业的发展。因此建立快速、简单和准确的诊断方法对CSF、PED的防控以及畜牧业的发展具有非常重要的意义。CSF、PED传统检测方法耗时较长、操作繁琐、易有交叉污染且阳性检出率低。RT-PCR等分子生物学检测方法以其简便快速、敏感性高和特异性强等优点在疾病诊断和科学研究中得到了广泛应用,但需要相关的仪器设备,并对技术人员的操作技能和分析能力要求较高。这些方法的不足限制了其在基层及临床检测的推广应用。重组酶聚合酶等温扩增技术（Recombinase Ploymerase Amplication,RPA）是一种新型核酸等温扩增技术,该技术无需温度循环,通过模拟生物体内DNA复制,短时间内即可完成对目的片段的核酸扩增,具有特异性高、敏感性强、反应程序简单和不依赖复杂仪器的优点。核酸试纸条是以流层析技术、胶体金技术以及免疫技术为基础,具有操作简单、检测速度快、敏感性高、结果直观易判读的特点。本研究将RT-RPA技术与全封闭式胶体金免疫层析技术相结合,建立了针对CSFV、PEDV的RT-RPA核酸试纸条检测方法,该方法在提取核酸后37℃恒温反应20 min条件下即可完成对CSFV、PEDV的快速检测,与传统检测方法相比具有快速、敏感、特异的优点。同时,我们对所建立的CSFV、PEDV检测方法的特异性和敏感性进行了分析,并用该方法对临床病料进行了初步应用,应用结果表明,建立的方法具有一定的临床应用价值。我们将所建立的CSFV、PEDV RT-RPA核酸试纸条检测方法对CSFV、PEDV、猪细小病毒（PPV）、伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、日本乙型脑炎病毒（JEV）、大肠杆菌其它相关病原的检测,结果显示,该方法对CSFV、PEDV检测结果为阳性,其它相关病原检测结果为阴性,表明CSFV、PEDV RT-RPA核酸试纸条方法具有良好的特异性。我们进一步对CSFV、PEDV RT-RPA核酸试纸条检测方法敏感性进行了研究,结果显示,CSFV的RT-RPA核酸试纸条方法对CSFV基因拷贝数最低检测限为103拷贝/反应,与RT-RPA琼脂糖凝胶电泳以及常规RT-PCR检测方法相比敏感性一致;对CSFV的cDNA含量敏感性最低检测限达1 pg,与RT-RPA琼脂糖凝胶电泳以及常规RT-PCR检测方法相比敏感性提高了10倍;对CSFV TCID50/mL最低检测限为102.5,与RT-RPA琼脂糖凝胶电泳以及常规RT-PCR检测方法相比敏感性一致。PEDV RT-RPA核酸试纸条方法对CSFV基因拷贝数和cDNA含量敏感性最低检测限分别为103拷贝/反应和1 pg,该数据比RT-RPA琼脂糖凝胶电泳以及常规RT-PCR检测方法均敏感10倍;其检测到的TCID50/mL最低检测限是102.5,与RT-RPA琼脂糖凝胶电泳检测方法相比敏感性一致,但比常规RT-PCR检测方法敏感10倍。将所建立的CSFV、PEDV RT-RPA核酸试纸条方法分别对临床疑似CSF（37份）、PED（38份）感染病料进行检测,结果显示:CSFV RT-RPA核酸试纸条检测方法与CSFV RT-PCR检测方法相比,二者的符合率为73.5%,PEDV RT-RPA核酸试纸条检测方法与PEDV RT-PCR检测方法相比,二者的符合率为84.5%。综上结果,本研究所建立CSFV、PEDV RT-RPA核酸试纸条方法具有特异性高、敏感性强的特点,且具有一定的临床可行性。同时为避免扩增产物的交叉污染以及外泄造成的假阳性的情况,本研究采用了全封闭式靶核酸扩增产物快速检测装置对扩增产物进行可视化检测,避免了气溶胶污染,实现了对病原的可视化检测,更易于满足兽医临床检测的需要。