许多对细胞生命活动至关重要的生化过程如DNA的复制、重组和转录、DNA的损伤修复等都是通过DNA和蛋白质之间的相互作用来调控的。传统的生物化学手段只能从整体水平上检测参与反应的生物分子集合体的“集群平均”效应，而无法追踪到单个分子在生化过程中的变化情况。单分子技术能够对单个分子的行为变化情况进行检测，其中基于流室的全内反射荧光显微技术被广泛应用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的研究中。该技术主要包括以下三个技术要点:(1)流室玻片的功能化技术;(2)DNA在流室中的固定技术;(3)蛋白的荧光标记技术。本研究通过一系列实验，初步建立了以上三项技术:　　(1)通过将使用氢氧化钾清洗玻片的方法和使用“食人鱼”溶液清洗玻片的方法结合起来，同时改进硅烷化和聚乙二醇包被的方法，建立了高效的功能化玻片的方法。使用改进的方法，可以获得很高的洁净度和很低的非特异吸附的玻片，显著提高了单分子观察过程中的信噪比;　　(2)通过使用不同长度的与λDNA末端互补的生物素修饰引物对λDNA在流室中进行两端固定，发现增加30个腺嘌呤核苷酸间臂的引物固定效率最高，建立了λDNA在流室中的两端固定技术;　　(3)通过在表达生物素连接酶的大肠杆菌体内共表达带有avi tag的目的蛋白，得到了生物素化修饰的CRISPR系统的dCas9蛋白、λ噬菌体的CI阻遏蛋白、乳糖操纵子的LacI阻遏蛋白;随后将它们与偶联有亲和素的量子点孵育，使用全内反射荧光显微镜观察到了它们与λDNA的结合。这初步表明利用avi tag给大肠杆菌表达的蛋白标记量子点的方法是可行的。另外，还构建了在基因组上组成型表达生物素连接酶的酿酒酵母菌株，在该菌株体内诱导型表达带有avi tag的DNA复制相关的Mcm10蛋白，利用Western blot成功检测到Mcm10-avi的生物素化，初步说明利用avi tag给酿酒酵母表达的蛋白标记量子点具有可行性。