血管组织工程支架微结构对细胞迁移行为的影响研究

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随着人们生活水平的提高和不良生活习惯的积累,心血管疾病逐步成为威胁人类生命健康的重点“敌人”,为了彻底根治这一顽疾,血管组织工程为病灶解除,血管组织重构提供了新的技术思路。理想状态的血管组织工程支架应当具备与天然细胞微环境,即细胞外基质相似的表面拓扑形貌、结构、力学性能和良好的生物相容性。细胞外基质中的大量存在的胶原纤维为细胞提供了适宜的力学环境和结构支持,其表面由螺旋错落排列的胶原蛋白分子构成的“D周期”结构成为实现细胞与细胞外基质间信息传导的关键结构。本文利用聚己内酯(PCL)材料,通过不同的加工工艺制备得到具有不同表面拓扑形貌特征的样品,并结合自诱导结晶技术制备得到具有不同尺寸SINSK(Self-induced nanohybrid shish-kebab)结构的样品,然后对样品的表面形貌、生物相容性及细胞迁移行为等进行探究。主要研究工作如下:第二章,通过热压、平板接收静电纺丝和滚筒接收静电纺丝三种加工工艺得到三组表面拓扑形貌具有明显差异的样品。对其进行SEM观测后发现,三组样品表面拓扑形貌存在较大差异,热压后的样品H-PCL表面光滑,平板接收的静电纺丝样品R-PCL纤维搭接随机无规,滚筒接收静电纺丝样品A-PCL纤维近乎平行排列,有明显的取向性。FFT测试表明,A-PCL取向性明显,FFT峰值明显高于R-PCL组分。细胞实验结果表明,内皮细胞(ECs)在A-PCL组分上增殖速度更快,细胞形态更趋于“长梭形”,长径比可达3.37。第三章,选用A-PCL组分纤维膜进行自诱导结晶处理,通过改变PCL溶液浓度实现了对kebab尺寸的调控,制备得到4组SINSK结构不同的样品。分别对其进行SEM、AFM观测和表面亲水性测试发现,随着kebab尺寸的增加,纤维表面SINSK结构发生明显梯度变化且kebab尺寸与PCL溶液浓度之间表现为近似线性的关系,纤维膜表面粗糙度R_a上升,亲水性得到改善;对其进行力学性能测试发现,纤维膜拉伸模量在SINSK结构的作用下于应变10%前后产生相反的变化趋势,kebab尺寸的增加导致纤维间产生接触“结点”,使得纤维膜断裂伸长率和表面杨氏模量逐渐增加,形成力学性能更加稳定的支架结构。第四章,将ECs接种于上述4组具有不同表面拓扑形貌的样品之上,对ECs在样品表面的增殖、形态、粘附和迁移行为进行了观测分析。结果表明,随着kebab尺寸的增加,细胞增殖行为更加明显,增殖速度也有所提升;细胞核型指数提高,细胞形态极性减弱;细胞黏着斑蛋白的平均激光强度和极化分布明显增强,细胞与细胞外基质间显示出更有力的力学结合;细胞迁移速度加快,迁移轨迹显示出与纤维排列方向一致的取向性,这一研究为血管组织工程支架的快速内皮化应用提供了新思路。
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