正常人和胆石症患者胆汁泡蛋白成核活性及糖链结构的比较

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[目的]本文所指的“不同人群”系指“胆固醇结石患者”和“正常人”,本项研究对这两个群体的胆汁中33.5kDa促成核泡蛋白的成核活性及泡蛋白糖链结构进行了比较,以期探讨33.5kDa泡蛋白促成核的机制。具体如下:1)检测不同人群来源的33.5kDa胆汁泡蛋白促成核活性并进行比较。2)分析不同人群来源的33.5kDa胆汁泡蛋白糖链结构特点的异同。3)探讨Western-Blot印迹法分析上述泡蛋白糖链结构特点在临床的初步应用价值。 [方法]1)利用超速离心法从正常人及胆石症患者胆汁中纯化33.5kDa胆汁泡蛋白,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其纯化效果。通过Holan法测定其成核时间(NT),比较两者促成核活性的差异。2)制备HRP-凝集素探针(HRP-ConA、HRP-DSA、HRP-L-PHA、HRP-LCA),取正常人胆汁及胆石症患者胆汁,经沉淀处理后溶解于样品缓冲液中,充分混匀后点样,行SDS-PAGE电泳。电泳结束后,切取与33.5kDa泡蛋白对应区带的凝胶,通过Western-Blot印迹法从凝胶上直接将蛋白质电转移至硝酸纤维素滤膜上,应用HRP-凝集素探针分析不同人群中33.5kDa胆汁泡蛋白糖链的结构特点,比较其差异。3)取术后带有“T”管的胆石症患者为治疗对象,按照随机序贯原则将胆石症患者分为两组(各10例),即胆宁片治疗组和对照组,术后第3天起开始给药,共用药一周,分别于术后第3、10天采取患者“T”管胆汁,通过HRP-DSA介导的Western-Blot印迹法分析两组患者胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链天线数目的变化情况。
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