丁香假单胞菌是一种常见植物致病菌，可以引发多种植物产生超敏反应，而且该菌还是一种冰核细菌，可使植物在较高温度下产生冻害。诱发植物冻害的关键因素为其分泌的一种蛋白，冰核蛋白(Icenucleationprotein，INP)。本课题以一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌MB03为研究对象，构建了一个转座突变文库，对影响丁香假单胞菌冰核蛋白分泌的相关活性效应基因的进行了研究。　　丁香假单胞菌MB03是本实验室所分离保存的一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌，其INP基因inaQ已完成克隆测序。本实验利用“自杀性”转座子pUT-miniTn5-Km2，采用双亲本接合的方法构建了丁香假单胞菌MB03的突变文库。根据inaQ基因序列设计引物扩增得到其N端，连接pET-28a表达载体，获得INPN蛋白并制备其抗血清，然后利用免疫学方法对INP分泌进行分析。先用膜杂交的方法对突变文库中菌株进行初步筛选，从中筛选出INP分泌发生明显变化的菌株，再对这些菌株进行Cy5流式细胞仪检测验证，从而得到INP分泌明显增强和明显减弱的菌株。　　对突变菌株的转座子插入位点鉴定采用改进的TAIL-PCR方法，通过已知序列上3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环，选择性地扩增得到目标片段，扩增产物直接测序。通过TAIL-PCR，从几株InaQ分泌活性增强或减弱突变株中扩增到疑似插入位点侧翼基因。经对其测序和将测序结果与MB03基因组序列进行对比，最终鉴定出mini-Tn5插入失活的基因柠檬酸合成酶基因(gltA)、一种糖基转移酶基因和一种2-氧代酸脱氢酶基因等。本研究选取其中的柠檬酸合成酶基因(gltA)进行了表达补偿，通过Realtime-qPCR和Westernblot分析比较，测定了表达补偿菌株与野生菌株的冰核蛋白InaQ表达活性与表达量，初步证实gltA基因的中断可导致InaQ表达的降低。