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目的:
通过观察11个不同发育时期花背蟾蜍(Bufo raddei)肾组织的发生过程,检测转化生长因子β(TGF-β2、TGF-β3)、水通道蛋白2(AQP-2)和Bax蛋白在花背蟾蜍肾(小管)发生过程中的表达,探讨两栖类前肾的发生与退化,中肾发生及分化的规律和特点,并研究各种蛋白的生物活性作用及相互之间的调控意义。
方法:
采用组织学方法观察不同发育时期花背蟾蜍肾组织的发生过程,应用免疫组织化学和体视学半定量检测TGF-β(β2、β3)、AQP-2及Bax蛋白在花背蟾蜍肾(小管)发生过程中的表达,用IPP专业图像分析软件,对其表达强度进行定量分析。
结果:
(1)第18期花背蟾蜍蝌蚪前端体节处的生肾节细胞,形成成对分节排列的前肾小管。前肾小管持续发育到第30期,之后开始退化。第26期花背蟾蜍蝌蚪在中肾前端附近出现一些中肾小泡。第28期花背蟾蜍蝌蚪形成中肾小管。第30期花背蟾蜍蝌蚪,中肾小管的盲端内陷,原始的肾小囊和肾血管球形成,中肾小管显著伸长并迂回曲折。第32期花背蟾蜍蝌蚪体前后部中肾组织均已形成完整的肾单位。第30~34期前肾组织依次退化。第34期肾小管伸长并发生折叠,出现集合小管、近端小管和远端小管的形态分化。
(2)第26~32期蝌蚪前肾近端小管和远端小管上皮细胞呈TGF-β2免疫反应阳性,第34~38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈TGF-β2免疫反应阳性;第26~30期蝌蚪前肾近端小管和远端小管上皮细胞呈TGF-β3免疫反应阳性,第32~38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈TGF-β3免疫反应阳性;第26~38期蝌蚪及幼蟾和成蟾肾集合小管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性;第26~34期蝌蚪肾近端小管和远端小管上皮细胞呈Bax蛋白免疫反应阳性,第38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈Bax蛋白免疫反应阳性。在肾发生过程中,TGF-β(β2、β3)和Bax蛋白的阳性反应呈现先增强后减弱的变化,AQP-2阳性反应呈持续增强的趋势。