【摘 要】
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目的:体内体外实验相结合,体内实验探讨黄芩苷对缺血性脑水肿的治疗作用及机制;以及在此基础上设计体外实验探讨缺血缺氧状态下内皮细胞水肿、内皮炎症与JAK2/STAT3信号通路的相关性。方法:第一部分——体内实验探讨黄芩苷对缺血性脑水肿大鼠的保护作用——建立大鼠缺血/再灌注实验模型,通过比较神经行为学评分比值的变化、脑梗死面积大小、脑组织皮层区超微结构以及病理学形态变化,评价黄芩苷对缺血/再灌注损伤大
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目的:体内体外实验相结合,体内实验探讨黄芩苷对缺血性脑水肿的治疗作用及机制;以及在此基础上设计体外实验探讨缺血缺氧状态下内皮细胞水肿、内皮炎症与JAK2/STAT3信号通路的相关性。方法:第一部分——体内实验探讨黄芩苷对缺血性脑水肿大鼠的保护作用——建立大鼠缺血/再灌注实验模型,通过比较神经行为学评分比值的变化、脑梗死面积大小、脑组织皮层区超微结构以及病理学形态变化,评价黄芩苷对缺血/再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用;通过观察脑组织含水量变化、核磁共振T2WI、DWI序列下水肿程度,评价黄芩苷对缺血性脑水肿的保护作用;依据脑组织及血清内一氧化碳（NO）、炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的表达,以及观察免疫印迹、免疫组化JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达变化情况,考察脑缺血/再灌注损伤后缺血性脑水肿与炎症反应的关系及黄芩苷通过JAK2/STAT3信号通路治疗缺血性脑水肿的影响。第二部分——体外实验探讨黄芩苷对氧糖剥夺内皮细胞的作用机制——选择黄芩苷进行细胞水平的研究,首先建立脑内皮细胞培养体系,CCK8法评价黄芩苷对正常培养24h脑内皮细胞细胞活力的影响;依据前期实验基础和参考文献摸索缺氧复氧条件,建立糖氧剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤模型,应用JAK2抑制剂AG490,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察激光共聚焦下内皮细胞水肿情况,检测细胞分泌的炎性因子含量变化,蛋白免疫印迹观察JAK2/STAT3信号通路蛋白表达量的变化,深入探究黄芩苷发挥作用的机制。结果:第一部分:与模型组比较,黄芩苷低剂量组(10mg·kg-1)和黄芩苷高剂量组(20mg·kg-1)可降低大鼠24h神经行为学评分分值,改善神经学行为;能够明显减少脑缺血再灌注后脑梗死面积,显著降低大鼠脑含水量情况,且黄芩苷高剂量组(20mg·kg-1)优于黄芩苷低剂量组(10mg·kg-1);核磁T2WI和DWI序列中,黄芩苷高剂量组(20mg·kg-1)和黄芩苷低剂量组(10mg·kg-1)均可减弱大鼠皮层、海马和纹状体区的信号强度,脑梗死区域减少,水分子弥散情况缓解,黄芩苷高剂量组效果较黄芩苷低剂量组显著,皮层与纹状体区结果对比黄芩苷对大鼠脑组织皮层水肿的效果较好;电镜和病理结果显示黄芩苷可改善内皮细胞崩解和毛细血管塌陷情况,缩小细胞间隙,改善紧密连接破坏情况,神经元变性、坏死受到抑制,一定程度上改善再灌注损伤大鼠皮层区超微结构和病理结构损伤;黄芩苷可明显降低血清及脑组织中一氧化氮（NO）含量,能够抑制血清及脑组织中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,增加IL-10的表达;免疫蛋白印迹结果显示黄芩苷可能通过JAK2/STAT3信号通路抑制炎症反应发挥保护作用,与免疫组化结果相互印证。第二部分:首先摸索黄芩苷对正常培养的脑内皮细胞细胞活力和缺氧条件,选用黄芩苷8μmol·ml-1浓度进行后续实验;流式细胞仪检测黄芩苷可减轻损伤内皮细胞凋亡情况;采用激光共聚焦技术观察细胞水肿情况,黄芩苷能够有效减轻内皮水肿程度,降低炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-17的表达;应用抑制剂AG490后,JAK2/STAT3信号通路相关蛋白水平表达结果与体内实验结果相互印证,黄芩苷能够抑制氧糖剥夺内皮细胞内炎性因子的表达、减轻细胞肿胀和阻断JAK2/STAT3信号通路的激活。结论:结合体内和体外实验结果表明黄芩苷能够减轻缺血性脑水肿大鼠皮层水肿,通过JAK2/STAT3信号通路调节炎性因子的表达,从而抑制炎症反应以降低内皮细胞水肿和抑制内皮炎症的发生,起到保护脑组织的作用。
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