媒介害虫斑布蚋绿色防控技术初步研究

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斑布蚋(Simulium maculatum)是世界性分布的重要医学昆虫之一,该虫不但叮吸人、畜血液,还传播病毒及致病细菌,严重影响了新疆阿勒泰地区农业牧业生产及百姓生活。目前国内外利用生物农药和物理防治来控制斑布蚋,但效果有限。随着人们对环境保护、昆虫抗药性和杀虫剂污染等问题的日益重视,研发一种绿色高效的防控方法已迫在眉睫。本文以斑布蚋为研究对象,将行为学筛选获得的功能性绿色植物源化合物和与斑布蚋气味结合蛋白(OBP)特异性结合的功能性化合物相联系,通过野外测试,寻找有效的引诱剂及趋避剂,为斑布蚋的绿色防控提供理论指导,并开发出诱捕器产品中的防控药剂。此外,根据斑布蚋宏基因组数据筛选微生物种类组成信息为其微生物防治奠定了基础。本文主要研究结果如下:(1)从斑布蚋生境中筛选出72种绿色植物源挥发物。通过Y管双选实验筛选出功能性绿色化合物,其中对斑布蚋具有显著吸引作用的化合物共7种,分别是:邻苯二甲酸二丁酯、(-)-芳樟醇、乳香精油、NENU-2、葡萄柚精油、甜茴香精油、茶树精油。对斑布蚋具有显著趋避作用的化合物共10种,分别是:邻二甲苯、水杨酸甲酯、十二烷、亚油酸乙酯、茉莉酸甲酯、NENU-1、麝香草沉香醇百里香精油、薰衣草精油、柑橘精油、桉油醇迷迭香精油。(2)从斑布蚋触角转录组数据中共筛选出17条OBP序列,其中包含一条GOBP序列。通过大肠杆菌原核表达体系和纯化体系获得了体外纯蛋白SmacOBP1,荧光竞争结合实验结果表明SmacOBP1的结合亲和性的特异性较强,仅对NENU-2的结合亲和性较高,为野外行为学测试提供了目标化合物。(3)通过野外行为学测试发现NENU-3诱集效果最明显,NENU-2次之,两种精油可作为新型诱捕器的诱芯,并开发斑布蚋诱捕器样本。同时发现NENU-1的趋避率为73.8%,可作为趋避剂进行开发。(4)从宏基因组数据中共筛选到367科,694属,1320种微生物,其中汉逊德巴利酵母菌(Debaryomyces prosopidis)占比最高,蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肉毒杆菌(Clostridium botulinum)占比较高,宏基因组数据为斑布蚋肠道微生物种类及丰富度研究提供了数据,对部分已报道微生物的功能进行了研究分析,为斑布蚋微生物防治研究奠定了基础。综上所述,本文通过行为学实验和荧光竞争结合实验共同筛选出具有明显诱集效果的引诱剂NENU-3和NENU-2,以及具有较好趋避作用的趋避剂NENU-1,并成功开发出斑布蚋诱捕器样本,为斑布蚋虫的绿色化学防控开辟新的途径,在斑布蚋嗅觉基因防控上具有重要指导意义。另一方面,筛选得到的微生物物种数据为斑布蚋生物防治提供了理论研究基础。
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