前方牵引致上颌骨改建压力侧骨缝周围组织中护骨素及Wnt-5a的表达

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目的:通过建立以微螺钉种植体为支抗的兔上颌骨前牵引模型,利用免疫组织化学及RT-PCR方法检测在正畸骨改建过程中护骨素(OPG)及Wnt信号通路中的信号因子之一Wnt-5a的表达情况,研究不同牵引时间对二者在压力侧骨缝周围组织中表达的影响,探讨它们在正畸骨改建中的作用及在口腔正畸过程中的表达意义。方法:采用15只发育期健康雄性新西兰兔,麻醉动物后行支抗种植钉植入术,部位为上颌骨硬腭部,两侧各植入一枚种植钉,待种植钉达到骨结合后,随机选取12只作为实验组,安放自制颅骨坚强外固定架,固定于兔双侧前肢形成稳定支抗,将Ni-Ti牵引弹簧连接于微种植体与固定架面具之间,并施以100g的牵引力进行牵张,建立上颌骨前移模型。其余3只为空白对照组,只植入钉但不牵引。每日观察动物饮食等健康状况,于牵引第10、20、30d处死4只动物,分离上颌骨,取以前颌缝为界的前部5mm处上颌第三上臼齿所对应的腭盖水平部即压力侧骨缝周围组织块标本,其中每组2只用于组织形态学研究,2只用于RT-PCR测定。对照组在各时间点各处死1只。苏木素-伊红染色观察兔骨缝周围组织的形态学变化,采用免疫组织化学染色及RT-PCR方法检测骨缝周围组织中OPG及Wnt-5a的表达情况。结果:①HE染色显示,随着牵引时间的递增,加力10d组,骨形成层成骨稀少形态不规则,有少量断裂的纤维,可见破骨细胞,形成骨陷窝;加力20d组,成骨活动明显,骨缘可见较密集、排列呈链状的成骨细胞和新骨。成骨细胞、成软骨细胞和成纤维细胞数量明显增加;加力30d组,某些区域的成骨细胞被周围基质和纤维包埋,并可见与牵引方向平行排列的新生骨小梁伸向骨缝区,前端部分相连接,周围分布着大量成骨细胞和成纤维细胞。骨缘不平,呈蚕食状,可见破骨细胞。②免疫组织化学染色显示OPG、Wnt-5a目的蛋白均呈阳性表达。阳性细胞呈棕黄色,主要定位于细胞浆。OPG阳性细胞表达部位集中于压力侧骨吸收部位。加力10d时,OPG表达与空白对照组比较无明显差异,呈弱阳性表达;加力20d时,压力侧OPG表达进一步增强,并可见新骨形成;加力30d时,OPG的表达呈现逐渐减弱趋势(P<0.05)。Wnt-5a阳性细胞表达分布不集中,散在分布于压力侧骨缝周围成骨细胞内。未见其阳性细胞表达与加力时间有明显线性关系(P>0.05)。③OPG、Wnt-5a在RT-PCR中出现了目的条带,与免疫组织化学染色结果一致。结论:在正畸牵引过程中,OPG参与了正畸骨改建的过程,它在正畸骨缝周围组织压力侧的表达具有时间依赖性;Wnt-5a于骨缝周围组织压力侧在蛋白和分子水平亦均有表达,但本实验中并未见其与牵引时间长短有明显相关关系,因此Wnt信号途径与正畸骨改建的相关性仍需进一步研究确定;年龄因素对正畸力作用下骨组织改建产生的影响以及幼、成年个体成骨细胞对正畸压力的反应机制是否存在区别与联系,这些都尚需进一步探讨。
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