第一部分BCL6与骨骼肌糖代谢的关系目的:初步探索BCL6与骨骼肌糖代谢的关系方法:通过GEO数据挖掘,探索骨骼肌中BCL6与胰岛素抵抗之间的相关性。检测伴胰岛素抵抗的野生型小鼠骨骼肌中BCL6是否发生改变。对普食和高脂小鼠进行单次极量平板运动实验,分别检测运动前后BCL6的表达变化。采用C2C12细胞诱导成肌,对肌管予以棕榈酸刺激,观察在细胞胰岛素抵抗模型中,BCL6的表达情况。然后对肌管分别予以不同时间和不同剂量的胰岛素刺激,观察胰岛素对肌管BCL6表达的影响。在细胞水平抑制和过表达BCL6,观察其对胰岛素信号通路是否有影响。结果:通过GEO数据挖掘发现在ob/ob和db/db小鼠骨骼肌中,BCL6表达较野生型小鼠显著下降。在ob/ob、db/db和高脂喂养的野生型小鼠中,运用RT-PCR和western blot检测方法,我们发现骨骼肌中BCL6的表达显著减少。在棕榈酸诱导的肌管中,BCL6表达也显著减少。胰岛素对肌管中BCL6的表达与浓度和时间均呈负相关。普食喂养的野生型小鼠运动后BCL6表达显著减少,而高脂喂养小鼠运动前后BCL6表达无显著差异。在细胞中抑制BCL6,可显著促进IR和AKT的磷酸化。结论:在胰岛素抵抗小鼠和细胞中,BCL6表达均显著降低。BCL6可能与高脂喂养小鼠运动能力显著下降有关。不同浓度的胰岛素均可抑制骨骼肌中BCL6的表达。在细胞中抑制BCL6,可显著影响胰岛素信号通路的变化。这些结果提示BCL6可能参与骨骼肌的糖代谢。第二部分BCL6对骨骼肌糖代谢的影响目的:探索动物水平敲除和过表达BCL6对骨骼肌糖代谢的影响方法:采用骨骼肌条件性敲除BCL6小鼠,观察普食和高脂喂养后,全身及骨骼肌发生的能量代谢变化。此外,通过注射过表达BCL6腺病毒,进一步观察其对骨骼肌糖代谢的影响。检测一般能量代谢指标:体重、脂肪比、骨骼肌比、摄食、呼吸商。血液生化指标:空腹血糖和胰岛素、餐后血糖、血脂、糖耐量、胰岛素耐量;骨骼肌糖代谢指标:糖摄取、糖原含量以及运动耐量等。结果:骨骼肌条件性敲除BCL6后,普食喂养小鼠体重无显著差异,高脂喂养的BCL6MKO小鼠体重较对照组显著下降（P<0.01）;高脂喂养的BCL6MKO小鼠皮下脂肪和性腺脂肪重量较对照组轻（P<0.05）,而腓肠肌、比目鱼肌和股四头肌质量无显著差异。普食和高脂喂养BCL6MKO小鼠,摄食无显著差异,但高脂喂养BCL6MKO小鼠呼吸商下降,其中糖氧化量显著降低,而脂肪酸氧化量显著增加（P<0.05或P<0.01）。高脂喂养BCL6MKO小鼠,空腹血糖、胰岛素水平、餐后血糖、血脂均更低,胰岛素耐量、糖耐量和胰岛素抵抗均显著改善,糖摄取、糖原含量和运动耐量均显著增加（P<0.05或P<0.01）;普食喂养小鼠,上述指标等均无显著差异。骨骼肌过表达BCL6可减少高脂喂养小鼠的糖摄取、糖原含量和运动耐量。结论:骨骼肌条件性敲除BCL6可显著改善胰岛素敏感性,促进骨骼肌糖摄取和糖原储备,增强高脂喂养小鼠的运动耐量。第三部分BCL6调控骨骼肌糖代谢的机制目的:探索BCL6调控骨骼肌糖代谢的机制方法:在骨骼肌中敲除或过表达BCL6,检测胰岛素信号通路及骨骼肌糖代谢关键蛋白的变化。通过查找转录因子相关网站和文献复习法筛选靶基因。检测普食和高脂喂养小鼠中BCL6和靶基因的变化,观察敲除和过表达BCL6对靶基因表达的影响。采用双荧光素酶报告实验,验证BCL6是否影响下游靶基因的转录。在细胞水平进一步验证BCL6如何调控骨骼肌糖代谢。结果:通过转录因子网站预测和文献阅读筛选出可能的下游靶基因,发现BCL6的下游信号靶点可能是FOXO家族基因。FOXO1在高脂喂养的野生型小鼠中表达显著增加,在高脂喂养的BCL6MKO小鼠中增加更明显（P<0.01）;而在高脂喂养的BCL6MOE小鼠中显著减少（P<0.01）。荧光素酶报告实验证实抑制BCL6可促进FOXO1的转录,而过表达BCL6可显著抑制FOXO1的转录（P<0.01）。在肌管同时过表达BCL6和FOXO1的表达,可部分逆转被抑制的糖摄取;反之,在肌管同时抑制BCL6和FOXO1,可部分逆转被促进糖摄取。BCL6对糖原含量的影响不能被FOXO1过表达所逆转。结论:BCL6可能部分通过影响FOXO1的表达而影响骨骼肌的糖摄取。此外,BCL6还可能通过其他直接或间接方式影响糖代谢关键蛋白PDK4、GS等的转录或活化而影响糖利用和糖原储备。