一株益生乳酸菌的分离鉴定、生物学特性及其对黑鲷肠道、血清的影响

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乳酸菌是公认安全的微生物,它是一类能利用碳水化合物发酵并产生大量乳酸的细菌。乳酸菌等益生菌可通过加强宿主机体肠道微生物的屏障作用,间接提高宿主非特异性免疫力,从而提高动物的健康水平和抗病力。本试验从黑鲷肠道分离出一株益生乳酸菌并通过生化鉴定和16S rDNA分子鉴定为明串珠菌属乳酸菌(Leuconostoc lactis)。将此株乳酸菌在体外对其生物学特性研究:此乳酸菌对低pH、胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶均具有较好的耐受性,但是高浓度的胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶会影响其生存活力。在测试的20种常见抗生素中,对多种抗生素敏感,对少量几种抗生素会产生抗性,如头孢噻吩、头孢曲松、妥布霉素、亚胺培南。此乳酸菌还具有体外自凝集性和共凝集性,在培养20h后,此乳酸菌的自凝集率达23.29%,对7种致病菌:大肠杆菌O157(Escherichia coli O157)、志贺氏菌(Shigella)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、变形杆菌(Proteusbacillus vulgaris)、单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的凝集率分别为10.74%、24.36%、16.49%、24.41%、20.99%、29.44%、31.21%。此外,此乳酸菌还具有广谱抑菌活性,对大肠杆菌(E. coli O157)、鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)、变形杆菌(P. vulgaris)、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio Harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、志贺氏菌(Shigella)、金黄色葡萄球菌(S. aureus)均有不同程度的抑制作用,其中,对大肠杆菌(E. coli O157)、鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)、变形杆菌(P. vulgaris)、弧菌(Vibrio)的抑制作用较好。选用50g左右的健康黑鲷幼鱼48尾为试验对象,随机分为空白对照组、溶菌酶对照组和明串珠菌乳酸菌试验组,溶菌酶组和乳酸菌试验组幼鱼按鱼体重的5%饲喂含7200U/g重组溶菌酶的配合饲料和含1×10~7cfu/g乳酸菌的配合饲料,饲喂56天,空白对照组饲喂配合饲料。试验14d、28d、42d、56d屠宰幼鱼取血样、肠道及内容物。测定血清生化指标;制备肠道组织横截面切片,HE染色观察测量肠道形态;采用PCR-DGGE技术分析肠壁、内容物菌群变化。结果表明:根据条带聚类相似性(UPGAMA)分析,试验14d、28d、42d、56d时各泳道肠壁菌群相似性为0.52、0.45、0.66、0.7,肠内容物菌群相似性,0.57、0.61、0.66、0.69。在肠壁的DGGE图谱中,14d、28d、42d和56d乳酸菌组的平均条带数显著(P<0.05)多于空白对照组和溶菌酶组;在内容物的DGGE图谱中,在56d时,乳酸菌组的平均条带数显著(P<0.05)多于对照组和溶菌酶组,说明明串珠菌乳酸菌可增加幼鱼肠道菌群多样性。对空白对照组、溶菌酶组和明串珠菌乳酸菌组的共同优势条带回收测序,发现黑鲷幼鱼肠道的优势菌群主要包括假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterbacter)、微球菌属(Micrococcus)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、红杆菌属(Rhodobacter)、枯草芽孢杆菌属(Brevibacterium)。饲喂乳酸菌的黑鲷幼鱼肠道肌层厚度、粘膜厚度、绒毛长度和绒毛宽度随试验时间延长均有增加的趋势,肌层厚度在14d、28d、42d和56d期间,乳酸菌试验组和空白对照组、溶菌酶对照组均无显著差异;粘膜厚度在14d、28d、42d和56d显著(P<0.05)大于空白对照,14d、28d时显著大于溶菌酶组的幼鱼肠道粘膜厚度;绒毛宽度在14d、28d、42d和56d和空白对照组、溶菌酶对照组均无显著差异;绒毛长度在14d、28d、42d和56d显著(P<0.05)大于空白对照组,在14d、28d、42d乳酸菌组绒毛长度显著(P<0.05)大于溶菌酶组;因此,饲喂乳酸菌可以促进黑鲷幼鱼肠道生长。饲喂乳酸菌的黑鲷幼鱼血清葡萄糖含量在56d时显著低于对照组幼鱼(P<0.05);乳酸菌组的血清蛋白质含量在42d显著(P<0.05)高于空白对照组和溶菌酶组;乳酸菌组的血清SOD活力在56d显著(P<0.05)高于空白对照组,然和溶菌酶组幼鱼14d、28d、42d和56d均无差异;乳酸菌组的血清溶菌酶活力在42d、56d显著(P<0.05)高于空白对照组,42d显著(P<0.05)高于溶菌酶组;抗菌活力在42d、56d显著(P<0.05)高于空白对照组,和溶菌酶组均无显著差异;由此可知,饲喂乳酸菌在一定程度上能对幼鱼血清各指标产生影响
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