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研究背景和目的胰腺癌是恶性程度极高的消化系统肿瘤,其死亡率居于恶性肿瘤相关死亡的第四位。尽管近年来胰腺癌诊治水平明显提高,其5年生存率仍低于5%。吉西他滨是目前胰腺癌辅助化疗的主要药物,但其有效率并不高。多个Ⅲ期临床试验尝试吉西他滨联合其他药物治疗胰腺癌,但同单药相比并没有取得更好的效果。近来有研究指出恶性肿瘤中有一小部分称为肿瘤干细胞,它维系着肿瘤发生和发展。目前,已在多个实体瘤包括胰腺癌中发现干细胞的存在。最新的研究显示,大部分实体瘤的化疗耐药至少部分同肿瘤干细胞有关。因此,寻找能够靶向针对肿瘤干细胞的药物可能最终提高肿瘤治疗疗效。盐霉素,最初被用在反刍类家禽抗细菌、真菌及寄生虫,近来研究发现其可选择性清除乳腺癌干细胞,故而,盐霉素可能是靶向肿瘤干细胞,我们通过体内外研究来探讨盐霉素单药或联合吉西他滨能否根除胰腺癌细胞。方法(1)体外实验研究盐霉素和吉西他滨对流式分选后的胰腺癌细胞毒作用1.自SW1990和AsPC-1中,流式细胞术分选CD133+/CD133-和侧群细胞(Side Population, SP)/非侧群细胞(Non Side Population, NSP)细胞。2.MTT实验检测盐霉素(Salinomycin, SAL)、吉西他滨(Gemcitabine, GEM)和药物联用(Combination, COM)对CD133+/CD133-和SP/NSP细胞增殖的影响。3. Annexin V-FITC实验SAL、GEM和药物联用72h后,对CD13T/CD133-和SP/NSP细胞凋亡的影响。4.自SW1990中以CD133为标记流式分选细胞后,SAL、GEM和药物联用72h后,观察体外是否能抑制CD133+/CD133-细胞的平板克隆。进一步行药物作用后细胞的悬浮肿瘤球培养来进一步检测药物对癌细胞自我更新能力的抑制。(2)药物治疗胰腺癌异移植瘤模型将自SW1990细胞流式分选后的CD133+和CD133-细胞分别注射于裸鼠背部。待皮下肿瘤生长至2-4mm时开始给药。分别腹腔注射：对照磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline, PBS), GEM为100mg/kg,每周给药2次,SAL为4mg/kg,隔日给药,COM为2药皆给。分别隔日测量并记录裸鼠体重及皮下移植瘤的体积,共观察25天。结果1、胰腺癌细胞株SW1990,AsPC-1可通过流式细胞术,以CD133及SP为标记,分别分离出并鉴定为胰腺癌干细胞。2、随着药物浓度增加,单药吉西他滨或盐霉素分别杀伤胰腺癌干细胞和非干细胞,二者相比,吉西他滨对非干细胞杀伤更具效力,而盐霉素对胰腺癌干细胞的杀伤效果显著。3、联合盐霉素和吉西他滨对胰腺癌干细胞和非干细胞都有杀伤作用,且相比于单药效果都显著(P<0.01)。4、盐霉素仅对胰腺癌干细胞的克隆形成和肿瘤球形成抑制效果好,但联合盐霉素和吉西他滨可清除胰腺癌干细胞及非干细胞的克隆形成及肿瘤球生长(P<0.01)。5、CD133+组中,SAL和GEM都可抑制肿瘤生长,但仅联合用药有显著性效果：GEM和联合用药都明显抑制有CD133-细胞形成的肿瘤(P<0.01)。在治疗过程中,各组裸鼠体重无明显差异。结论盐霉素可抑制胰腺癌干细胞生长,且体内外实验表明,联合盐霉素和吉西他滨可明显抑制胰腺癌干细胞和非干细胞。盐霉素可作为胰腺癌联合治疗模式的重要候选。