玉米蛋白植入动物体内的免疫学分析方法初探、仿生涂层制备以及偶氮苯—胆固醇衍生物在防晒领域的应用

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本文对玉米蛋白(zein)材料植入动物体内后的免疫学分析方法进行了摸索,对玉米蛋白三维(3-D)多孔支架材料表面的仿生矿化方法进行了初步研究,并研究了偶氮苯-胆固醇衍生物4-cholesterocarbonyl-4’-(N,N’-diethylaminobutyloxy)azobenzene(CDBA)在防晒领域的应用。方法:八只雄性SD(SpragueDawley)大鼠随机分成两组:空白对照组和蛋白材料植入组。将玉米蛋白管植入到SD大鼠背部两侧皮下,于植入后一、二和四周分别对两组SD大鼠进行眼眶取血,并用流式细胞仪检测血液中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的百分率。玉米蛋白3-D多孔支架材料植入SD大鼠腿部肌袋一个月后,连同周围组织将3-D多孔支架材料取出,对石蜡切片方法进行摸索,制备出材料完整的病理切片,进行HE(hematoxylin-eosin)染色并模拟免疫组化染色。连同周围组织将SD大鼠皮下植入一个月的蛋白管取出,用经过改进的石蜡切片方法制备完整的石蜡切片,HE染色后显微镜下观察。玉米蛋白3-D多孔支架材料置于模拟体液中,尝试不同的处理方法对玉米蛋白3-D多孔支架材料表面进行仿生矿化,用场发射扫描电子显微镜(SEM)观察仿生矿化后多孔支架材料各个表面的形貌,用能谱(EDS)分析其Ca/P比。将偶氮苯-胆固醇的衍生物CDBA组装入脂质体膜中,进行周期性的紫外光和日光灯循环照射,观察CDBA脂质体的结构变化和光致异构情况。研究CDBA脂质体与甘油和丙二醇混合后体系的稳定性以及紫外-可见光照射后的光致异构率,评价紫外光照射下脂质体中包含物的光控释放情况。应用关键波长法和紫外分光光度计法体外评价CDBA脂质体对UVB和UVA防护效果。同时,用裸鼠评价了CDBA脂质体的紫外防护功能。结果与结论:利用流式细胞仪技术,成功检测出了SD大鼠皮下植入玉米蛋白管后,不同时间点外周血中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的百分率。玉米蛋白管植入SD大鼠皮下后一周,蛋白管植入组外周血中CD4~+(P<0.01)和CD8~+(P<0.05)T淋巴细胞含量百分率下降,植入后二和四周,蛋白管植入组外周血中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞含量百分率(P>0.05)均无明显变化。植入后一、二和四周,蛋白管植入组CD4~+/CD8~+的比值(P>0.05)均无显著性差异,这表明蛋白管植入动物体内后机体的免疫应答未被激发,未影响机体的免疫反应。并且,根据玉米蛋白的性质,摸索和改进了石蜡切片制备方法,克服了切片制备过程中贴片不牢固问题和材料碎裂的问题,制备出大鼠皮下植入一个月的完整玉米蛋白管切片,HE和免疫组化染色处理结果令人满意。在玉米蛋白3-D多孔支架材料表面仿生矿化的多个参数中,恒温摇床60rpm,37℃孵育3天的条件下,材料六个面Ca/P的平均值为1.29,各个面间的Ca/P差异最小,标准偏差为0.07。表明各个面的涂层比较均匀。CDBA脂质体具有紫外吸收能力,周期性的紫外光和日光循环照射过程中,CDBA脂质体的结构和光致异构不会受到影响,表明CDBA脂质体可以作为反复性使用的防晒剂。CDBA脂质体与5%丙二醇和5%甘油混合后,CDBA脂质体的稳定性以及光致异构不受影响。载有阿霉素(DOX)的CDBA脂质体与一定浓度丙二醇混合后也不会影响DOX的释放。通过关键波长法,检测出CDBA脂质体按照光谱分级应该为4星级,具有UVA防护作用。通过紫外分光光度计法,检测出CDBA脂质体和化妆品底物混合后,其吸光值在0.5和1.0之间,说明此配方具有UVB防护功能,可适用于冬日阳光、夏日早晚阳光和阴天。裸鼠动物实验也表明CDBA脂质体具有很好的紫外防护功能。因此,CDBA脂质体具有应用于防晒化妆品的潜力。
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