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第一部分影响年轻女性冻胚移植活产的主要临床因素背景:近几年,“全胚冷冻”策略得到了广泛的推广及重视。然而,影响冻胚移植活产的因素除了年龄以外,其余的尚不明确。因此,识别并改善影响冻胚移植后妊娠活产的因素是目前临床上的热点问题。目的:探讨影响正常排卵的年轻女性冻胚移植活产的主要临床因素。方法:此研究是对已经发表的山东大学附属生殖医院领衔完成的一项关于正常排卵女性冻胚移植和鲜胚移植后活产率对比的多中心随机对照试验（ChiCTR-IOR-14005406）数据的二次分析。本研究纳入了 917名最终接受卵裂期冻胚移植的年轻女性,分析了 16个可能影响冻胚移植后活产的临床候选风险因素,进行单因素分析和多因素分析以评估预测因素与妊娠活产之间的关系,确定影响冻胚移植后活产的独立风险因素。结果:在这项研究中,冻胚移植患者的总活产率为53.0%（486/917）。经过单因素和多因素分析最终确定了三个独立预测因素作为影响年轻女性冻胚移植活产率的主要因素:不孕年限[比值比（odds ratio,OR）:0.933,95%的置信区间（confidence interval,CI）:0.876-0.995,P=0.033],冻胚移植前子宫内膜厚度（OR:3.375,95%CI:1.556-7.321,P=0.002）和移植冻胚的数量（OR:2.653,95%CI:1.226-5,743,P=0.013）。受试者工作特征曲线结果显示:不孕年限的截值为4.5年,子宫内膜厚度的截值为0.89cm。结论:对于正常排卵的年轻女性,不孕年限、冻胚移植内膜厚度以及移植卵裂期胚胎数目是影响妊娠活产率的重要临床因素。这一研究有助于冻胚移植的临床决策及咨询,以提高年轻女性冻胚移植后的活产率。第二部分冻胚移植后妊娠期高血压疾病的预测模型背景:大量研究表明,冻胚移植引起的妊娠期高血压疾病的发病率可能要高于鲜胚移植与自然妊娠。尽早识别易患妊娠期高血压疾病的高危患者,有利于尽早预防及改善预后,尤其是在高发的冻胚移植人群中更是至关重要。因此,明确影响冻胚移植活产的临床高危因素并建立预测模型是进行前瞻性个体化预测和针对性预防治疗的最有效方法。目的:建立冻胚移植后妊娠期高血压疾病的预测模型及构建列线图。方法:此研究为回顾性分析研究,数据来源于2011年1月至2019年12月在山东大学附属生殖医院接受冻胚移植并妊娠的患者,最终纳入27948例。通过随机化方法将数据集以7:3的比例随机分为训练集及验证集。采取了最小绝对收缩和选择算子法（least absolute shrinkage and selection operator,LASSO）来进行预测因素的筛选,并根据结果建立了预测冻胚移植后妊娠期高血压疾病的模型以及绘制了列线图。利用训练集来构建预测模型及绘制列线图。利用验证集来内部验证模型。采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）、校准曲线及决策曲线对模型的预测能力,准确度及临床价值进行评估。结果:在训练集（n=19564）和验证集（n=8384）中,妊娠期高血压疾病患者的发生率均为6.81%。最终将体重指数、平均动脉压、子宫内膜准备方案和妊娠数4个预测因素纳入最终模型中并绘制列线图。训练集的ROC的曲线下面积为0.726,验证集为0.718,结果提示模型具有较好的预测疾病能力。使用决策曲线分析和校准曲线对该模型进行进一步的评估,研究结果显示,此模型具有较好的校准能力和临床收益。结论:本章节成功建立了冻胚移植后妊娠期高血压疾病发生的预测模型,并在此基础上绘制了相应的列线图。模型中包括了体重指数、平均动脉压、冻胚内膜准备方案及妊娠数4个因素。经过验证,该模型有较好的临床预测能力及临床获益,值得临床推广应用,以筛选冻胚移植后发生妊娠期高血压疾病的高危人群,降低发生率并改善妊娠结局。第三部分妊娠早期血浆外泌体与冻胚移植后妊娠期高血压疾病高发的机制研究背景:近期研究发现,冻胚移植后妊娠期高血压疾病的发病风险要高于鲜胚移植及自然妊娠,但发病机制尚不明确。有研究表明妊娠期高血压疾病患者与正常妊娠女性相比,母体血浆中存在的总外泌体及胎盘外泌体浓度及其中微小RNA（microRNA,miRNA）的含量会发生变化。目的:探究冻胚移植后妊娠早期血浆外泌体浓度及外泌体miRNAs的表达与妊娠期高血压疾病的关系。方法:本研究采用差速离心法分离血浆外泌体。比较冻胚移植患者（29例）与鲜胚移植患者（30例）妊娠早期血浆外泌体的浓度,并进行（6例VS 6例）冻胚移植及鲜胚移植孕早期血浆外泌体的miRNAs高通量测序,筛选miRNAs差异表达谱,扩大样本量至44例冻胚移植及44例鲜胚移植患者,通过实时定量PCR对差异表达miRNAs进行验证。应用CCK-8实验检测滋养细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,明确差异表达的miRNA。利用生物信息学软件对miRNA的靶基因进行预测,通过实时定量PCR、蛋白电泳、双荧光素酶报告实验等方法进行验证,在滋养细胞中下调靶基因,检测滋养细胞增殖和凋亡的情况。结果:冻胚移植患者与鲜胚移植患者相比妊娠早期母体血浆中总外泌体浓度显著升高,胎盘来源的外泌体浓度无明显差异。冻胚移植及鲜胚移植孕早期血浆外泌体的miRNAs高通量测序的结果显示:冻胚移植患者与鲜胚移植患者血浆外泌体中存在21条差异表达的miRNAs,其中冻胚移植存在7条表达上调的miRNAs,14条表达下调的miRNAs。进一步扩大样本验证后发现,冻胚移植患者孕早期血浆外泌体miR-409-3p表达显著下调,且下调miR-409-3p对滋养细胞的增殖有显著的抑制作用,凋亡有显著的促进作用。经验证发现,候选肿瘤抑制基因1（tumor suppressor candidate 1,TUSC1）是 miR-409-3p 的靶基因。miR-409-3p 可以通过靶向作用于TUSC1基因进而对滋养细胞的增殖及凋亡产生影响。结论:与鲜胚移植患者相比,冻胚移植患者妊娠早期母体血浆外泌体浓度显著升高,胎盘来源外泌体浓度无统计学差异,且血浆外泌体miRNA表达谱存在差异。经验证发现冻胚移植妊娠早期母体血浆外泌体中的miR-409-3p显著下调,且下调的miR-409-3p通过上调TUSC1基因的表达来抑制滋养细胞的增殖及促进滋养细胞的凋亡。血浆外泌体可能作为致病miRNA的载体,在冻胚移植患者妊娠期高血压疾病发病中起到一定作用,为冻胚移植后妊娠期高血压疾病的发生提供新的研究方向。