目的:七氟醚作为最常用的吸入麻醉药之一,因其独特的药理学特点而广泛应用于产科及小儿麻醉。但越来越多的证据表明七氟醚对发育期大脑具有一定的神经损害作用,七氟醚的早期暴露可能影响大脑发育和远期认知功能。而孕酮作为一种神经甾体,其神经保护作用逐渐受到关注。本研究试图从细胞水平证明孕酮对七氟醚所致神经损伤具有保护作用,并尝试阐明部分相关分子机制以及孕酮受体在该过程中的作用,为防治七氟醚造成的神经损伤提供新的思路。方法:1、原代海马神经元培养:取新生24 h内的SD乳鼠,分离海马组织,提取细胞并培养至第7天用于实验,采用NeuN染色鉴定神经元纯度。2、建立七氟醚损伤神经元模型:采用一定浓度（2%、4%、8%）七氟醚处理原代海马神经元6 h或12 h,对照组细胞通入95%空气和5%CO₂处理。筛选最适七氟醚处理强度进行后续实验。3、分组及处理:取新培养的原代海马神经元,随机分为4组:溶剂组（C组）、七氟醚组（S组）、孕酮+七氟醚组（PS组）、醋酸乌利司他+孕酮+七氟醚组（UPS组）。其中P组加入孕酮1μmol/L预处理1 h后行七氟醚暴露;U组先加入醋酸乌利司他1μmol/L处理1 h,再加入孕酮1μmol/L处理1 h,最后进行七氟醚暴露;C组和S组在相应时间点加入DMSO后,S组通入七氟醚处理,C组通入95%空气和5%CO₂处理。4、观察与检测:在光学显微镜下观察神经元形态变化,用透射电镜观察神经元的超微结构变化,采用CCK-8法检测神经元存活率,采用TUNEL染色检测细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p-Akt、Akt、caspase-3蛋白表达水平。结果:1、高浓度长时间（8%,6h;4%/8%,12h）七氟醚暴露可造成原代海马神经元存活率显著下降（P<0.05）,而低浓度短时间（2%/4%,6h）则无影响（P>0.05）。2、4%七氟醚作用6h可造成原代海马神经元胞体萎缩溶解,神经突起变少、变短、变细,细胞间联系减弱,且在透射电镜下可观察到细胞内出现自噬体,线粒体固缩,线粒体双层膜结构被破坏,但七氟醚对细胞凋亡率及caspase-3蛋白表达水平的影响不显著（P>0.05）。3、与C组比较,S组细胞活力明显下降、细胞凋亡率明显升高、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显下降（P<0.01）;与S组比较,PS组细胞活力明显升高、细胞凋亡率明显降低、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显升高（P<0.01）;而与PS组比较,UPS组细胞活力明显下降、细胞凋亡率明显升高、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显下降（P<0.01）。形态学上,C组细胞形态正常,S组和UPS组细胞表现出凋亡形态,而PS组细胞形态基本正常。结论:1、七氟醚的神经毒性具有时间及浓度依赖性,临床使用七氟醚强度—4%七氟醚作用6h不会造成原代海马神经元凋亡显著增加,但可以影响其形态,造成细胞器损伤。2、孕酮可通过孕酮受体上调Akt蛋白磷酸化水平减轻七氟醚诱导的原代海马神经元损伤。