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研究目的:检测Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(cGMP dependent proteinkinaseⅡ,PKGⅡ)在相同组织来源的正常细胞、转化细胞和癌细胞中的表达及活性的差异,探讨相关的机制,以及PKGⅡ在基因调控中的作用。研究方法:(1)选择相同组织来源的正常细胞、转化细胞株和癌细胞株,通过逆转录PCR方法检测PKGⅡmRNA表达水平差异。(2)选择相同组织来源的正常细胞、转化细胞株和癌细胞株,通过Western blotting方法检测PKGⅡ蛋白表达水平差异。(3)以8-pCPT-cGMP特异性激活PKGⅡ,通过Western blotting方法检测PKGⅡ底物血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator-stimulatedphosphoprotein,VASP)的磷酸化以反映PKGⅡ的活性。(4)用PCR方法扩增PKGⅡ启动子区的序列,进行测序分析,阐明在肿瘤细胞中PKGⅡ启动子有无突变。(5)选择代表性细胞,转染编码PKGⅡ的质粒DNA,以8-pCFT-cGMP特异性激活PKGⅡ,用mRNA差异显示技术检测PKGⅡ在基因调控中是否存在作用。研究结果:(1)在大鼠和人来源的细胞株中,PKGⅡ在转化细胞中基因水平表达铰高,而在癌细胞中的表达明显降低。(2)在大鼠和人来源的细胞株中,PKGⅡ在转化细胞中蛋白水平表达较高,而在癌细胞中的表达低。(3)在大鼠和人来源的细胞株中,VASP在转化细胞中磷酸化水平较高,而在肿瘤细胞中磷酸化水平较低,推断出PKGⅡ在癌细胞的活性明显低于转化细胞。(4)在人胃癌细胞SGC-7901中,PKGⅡ启动子区域存在着碱基突变。(5)在代表性细胞Cos7细胞中,未见PKGⅡ对基因调控有明显的影响。结论:在相同组织来源的情况下,与转化细胞相比,PKGⅡ在肿瘤细胞中的表达和活性较低;在人胃癌细胞SGC-3901中,PKGⅡ启动子区域存在着碱基突变;PKGⅡ对基因调控可能不存在作用。