【摘 要】
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该实验的研究重点是分析病毒感染诱导的差异基因所编码蛋白在细胞内的功能意义,通过HSV-1型病毒刺激KMB-17细胞后,进行差异显示分析,根据分析结果,克隆得到了一个差异基因,命
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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该实验的研究重点是分析病毒感染诱导的差异基因所编码蛋白在细胞内的功能意义,通过HSV-1型病毒刺激KMB-17细胞后,进行差异显示分析,根据分析结果,克隆得到了一个差异基因,命名为HSV-1刺激相关基因(HSV-1 stimulation related gene 1,hsrg1),经GenBank检索为一未知功能编码基因,全长1748bp,CDS全长为1641bp,我们将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-HSRG1表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了较高的表达,并采用Glutathione Sepharose4B进行亲和纯化,获得较高纯度的目的蛋白,用该蛋白免疫小鼠后制备的特异抗体,蛋白印迹实验表明原核表达的HSRG1能被该抗体特异识别.该抗体在病毒刺激KMB-17细胞前后的免疫沉淀实验(IP)中亦表现出较好的特异性,显示我们所表达的HSRG1蛋白具有与天然蛋白相同的构象.多组织mRNA表达谱分析表明,hsrg1基因在骨骼肌、脑、心脏、皮肤等组织中有表达.
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