【摘 要】
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目的探讨人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium, HRPE)细胞培养上清液联合全反视黄酸(all-trans Retinoid Acid,RA)对骨髓间充质细胞(bone marrow stroma
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目的探讨人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium, HRPE)细胞培养上清液联合全反视黄酸(all-trans Retinoid Acid,RA)对骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells.BMSCs)诱导分化的影响。方法实验分3组:HRPE+RA+ BMSCs共培养组、HRPE+ BMSCs共培养组,和对照组(单独BMSCs)。体外培养人视网膜色素上皮细胞(HRPE)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),取第2代HRPE和第3代BMSCs接种于Transwell双层培养板内共培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,采用免疫细胞化学染色、RT-PCR检测胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物烯醇化酶(NSE)、光感受器特异性标志视紫质(Rhodopsin)在诱导细胞中的表达。结果共培养两周后的细胞置倒置相差显微镜下观察: HRPE培养上清液+BMSCs+RA组在诱导14天后,BMSCs出现较多的长突起,部分细胞发生迁移并相互之间建立突触联系。不加RA则分化细胞明显较少,也少有建立突触联系的细胞;免疫细胞化学染色显示: HRPE培养上清液+BMSCs+RA组不但能诱导BMSCs更多的表达GFAP(OD:0.347.士0.057)、NSE(OD:0.261士0.058)、部分细胞还表达光感受器细胞特异性标志Rhodopsin(OD:0.216士0.066)。将三种培养条件下所表达的阳性细胞分别进行统计学分析,组间差异有统计学意义(GFAP: F =68.969、P < 0.001;NSE: F =48.672、P < 0.001;Rhodopsin:F =24.34、P < 0.001)。RT-PCR鉴定结果显示同样结果。结论HRPE培养上清液+BMSCs+RA可以诱导BMSCs向神经胶质细胞、神经元与视细胞分化。
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