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目的:子宫颈癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,是女性第二大致死性疾病,发病率呈年轻化和不断上升趋势。全世界每年约有50万新发病例,仅次于乳腺癌。大多数宫颈癌是由癌前病变——子宫颈上皮内瘤变(cervical Intraepithelial neoplasia, CIN)逐步发展形成的,早期诊治可以有效避免病变的进展和转化。对有些癌前病变,因受观察者主观因素的影响,难以做出准确诊断。因此,寻找用于宫颈癌前病变的辅助诊断,十分重要。目前普遍认为宫颈癌变与高危型人类乳头状瘤病毒16/18型(HPV16/18型)的持续感染密切相关。HPV的致癌过程常伴有原癌基因的突变或抑癌基因的失活,p16基因又称多肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor, MTS1),它是人们发现的第一个直接作用于细胞周期,抑制细胞分裂的基因。以往研究证实,在子宫颈癌发生过程中存在P16蛋白表达异常,但其表达是升高,还是降低说法不一;近年来,P16与宫颈癌的关系已有较多研究,但对于P16蛋白表达在CIN组织病理学诊断和分级中的作用及意义尚未明确。本课题通过自制组织芯片检测正常宫颈鳞状上皮、CIN、宫颈鳞癌中P16蛋白的表达及HPV16/18感染的情况,研究病毒感染在子宫颈癌变过程中的作用;观察P16蛋白在不同病变中的表达,探讨P16蛋白过表达在宫颈癌变中的意义;研究宫颈鳞癌及CIN组织中HPV感染与P16蛋白表达的密切关系,分析HPV16/18感染对P16蛋白表达的影响,从而为临床寻找更为客观可靠的指标用以监测病变的进展,以及为进一步揭示HPV致癌机制及协同作用因素提供依据,对子宫颈癌的早期预防、早期发现、早期治疗有重要的现实意义。方法:1收集子宫颈组织标本168例,其中宫颈鳞癌44例,CIN96例,正常宫颈28例。2应用自制组织芯片技术将168例供体标本,按阵列设计顺序依次放入受体蜡块中,融合、切片、捞片、烤片制成需要的组织芯片。3应用免疫组织化学技术(SP法)测定宫颈鳞癌、CIN、正常宫颈鳞状上皮组织中P16表达。4采用原位杂交技术检测HPV-DNA16/18在宫颈鳞癌、CIN及正常宫颈鳞状上皮组织中的表达情况。5应用SPSS13.0统计软件,计数资料进行χ2检验、等级资料采用非参数秩和检验、相关性采用Spearman秩相关分析。以α=0.05为检验水准,当P<0.05时具有统计学意义。结果:1组织芯片制备按课题需要制作7×5,6×5芯片共5张,组织点阵排列整齐,无点阵移位现象,有11个位点缺失或组织无意义,其他位点均可见足够的组织结构。组织位点的形态可观测率在90%以上。HE染色均匀,无脱片、异位和皱折。免疫组织化学染色及原位杂交,阳性定位清楚,背景干净,无掉片现象。2 P16在宫颈上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学方法检测41例宫颈鳞癌、90例CIN及28例正常宫颈鳞状上皮组织中P16的表达。正常宫颈鳞状上皮中P16缺乏表达,病变组织中P16的表达有明显的分层现象,低级别的CIN中阳性细胞主要局限于中下层,而高级别的CIN则可超过上皮层的下2/3或达全层。P16阳性表达率:宫颈鳞癌100%(41/41), CINⅢ级96.67%(29/30)、CINⅡ级96.30%(26/27)、CINⅠ级42.42%(14/33)。P16在正常宫颈、各级别CIN及宫颈鳞癌中的阳性表达强度之间比较,结果有统计学意义(P<0.05),且随着病变程度的增加,阳性表达以过表达即中度阳性(++)~强阳性(+++)为主。在正常宫颈和CINⅠ级,CINⅠ级与CINⅡ级之间,P16阳性表达率比较,结果有统计学意义(P<0.05);CINⅡ级与CINⅢ级及CINⅢ级与宫颈鳞癌之间,均无统计学意义(P>0.05)。3 HPV-DNA16/18在宫颈上皮不同病变中的表达采用原位杂交技术检测HPV-DNA16/18在41例宫颈鳞癌、90例CIN(包括30例CINⅢ,27例CINⅡ,33例CINⅠ)及28例正常宫颈鳞状上皮组织中的表达。正常宫颈鳞状上皮中HPV-DNA无表达,从CINⅠ到宫颈鳞癌,HPV-DNA的表达情况依次为15.2%(5/33)、44.4%(12/27)、60%(18/30)、53.7%(22/41),差异有统计学意义(P<0.05)。HPV-DNA阳性率在CIN病变及宫颈鳞癌中明显高于正常宫颈鳞状上皮(P<0.05),但在CINⅡ级与CINⅢ级、CINⅢ级和宫颈鳞癌之间,HPV-DNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。4子宫颈病变中P16表达与HPV16/18感染的相关性分析子宫颈病变中HPV16/18阳性率越高,P16蛋白表达的程度越高,呈正相关(r=0.36,P<0.05)。结论:1免疫组化方法标记P16蛋白,在各级别CIN及宫颈鳞癌中其阳性表达率(+~+++)均高于正常宫颈组织,可协助鉴别正常宫颈鳞状上皮与发生病变的鳞状上皮。2免疫组化方法标记P16蛋白,从正常宫颈鳞状上皮到宫颈鳞癌,随着病变程度的增加,中度阳性~强阳性(++~+++)表达逐渐增多,其阳性程度可协助判定病变程度。3免疫组化方法标记P16蛋白,正常宫颈鳞状上皮中P16缺乏表达,P16的表达有明显的分层现象,低级别的CIN中阳性细胞主要局限于中下层,而高级别的CIN则可超过上皮层的下2/3或达全层,有助于CIN级别的判定。4原位杂交技术检测HPV-DNA16/18,宫颈病变组阳性率高于正常宫颈组,证实子宫颈鳞状细胞癌的发生与HPV16/18感染密切相关。5 P16表达与HPV16/18感染的相关性分析表明,子宫颈病变中HPV16/18感染可导致P16蛋白的表达增加。