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二化螟Chilo suppressalis (Walker)属鳞翅目(Lepidoptera)、螟蛾科(Pyralidae)、禾草螟属(Chilo),俗称钻心虫等,是一种重要的钻蛀性水稻害虫,广泛分布于我国各水稻生产区。二化螟的寄主除水稻外,还有茭白、玉米、甘蔗、稗草、油菜等。近年来,二化螟的发生有扩大加重趋势,威胁着水稻生产。遗传多样性及其演变规律是研究生物多样性和物种进化的核心问题之一,也是评价自然生物资源的重要依据。长期的地理隔离、寄主隔离和不同环境条件的胁迫,对昆虫种下分化和新种形成有重要促进作用。昆虫遗传多样性的研究为揭示生物进化机制提供背景资料,同时促进害虫的有效治理,具有重要的理论和实践意义。本研究对二化螟种群间和种群内进行遗传差异分析,主要结果如下。1.利用AFLP标记对中国11省13个二化螟地理种群进行了遗传多态性分析,以揭示不同区域种群间遗传分化,为建立较准确的二化螟发生区划及区域治理对策提供新的依据。选取3对引物,共扩增出445条带,其中多态性条带386条,多态性比率为86.75%。种群问分化系数(Gst)为0.74,基因流仅为0.1757;13个地理种群间遗传一致度较高,均大于0.67。遗传距离聚类分析表明,二化螟13个地理种群可区分为4类,其中淮北平原类(赣榆、阜宁、阜南)、东南山区类(鄞县、闽侯、阳朔)荆湘川类(荆州、邵阳、德阳)三类种群分别具有较一致的地理气候特征或相对较近的距离。研究还表明,与其他测试种群的遗传距离普遍较大、相对孤立的地理种群,其聚类结果有一定的随机性,因此,取样点较多、且样点分布较均匀的聚类分析结果才有较高可信度。2.田间多点调查揭示,越冬前二化螟的田间种群发育很不一致,极端相差达4个龄期,以4-6龄高龄幼虫为主;越冬后,在同一种群世代中,二化螟蛾的羽化历期达30天以上,呈现明显的异步化发生特点。其中,发育极端早、迟的二化螟个体问是否存在与发育速度有关、相对稳定的遗传差异,值得进一步探究。3.为探索二化螟异步化发育的遗传机制,首先利用RAPD技术从337对随机引物扩增结果中筛选异步化发育的差异片段,并转换成SCAR标记检测二化螟的阜宁(FNing)和上饶(SR)品系。结果表明:337对随机引物中有1对引物(S117)能扩增到差异片段,特异片段(L820)只在发育极慢的蛹(L)中检测到,在发育快的蛹(E)中检测不到。进一步将此RAPD差异片段转换成SCAR标记后,利用合成的S117S1SCAR标记引物,在FNing和SR连续2代的发育极快与极慢的蛹中检测,其中在发育极快的蛹中检测到4%,而在发育极慢的蛹中检测到67.39%,且该特异性和雌雄性别无关。该片段与脑炎微孢子虫起始转录因子IIF辅助亚基(Eint031520)和盐基tRNA核糖转移酶(Eint060220)分别有66%、68%的同源性,盐基tRNA核糖转移酶能够影响体外转糖基酶活性和体内的线粒体定位。4.再利用AFLP技术,分析比较二化螟种群内异步化发育类群。结果发现,Pst Ⅰ与Taq I组合的36对引物中,有一对引物(P1T1)能扩增到特异性差异片段。该特异片段L130只在FNing发育极慢的蛹中检测到;对SR种群检测表明,此特异性不明显。但在FNE和SRE中发现比较一致的特异性片段E300,在FNing和SR种群连续2代的随机个体检测中发现,此特异性片段在发育极快的蛹中检测到94%,在发育极慢的蛹中仅检测到21.74%。对此片段克隆测序表明,E300为未知蛋白。将E300与L130序列比对发现,其相似性达69.3%,由此推测L130和E300可能为同一家族,而L130与香脂白杨蛋白质酪氨酸磷酸酯酶有72%的相似性。酪氨酸磷酸酯酶在细胞中的功能都是和细胞的生长、分化和转化有关,因此,E300可能与生物各时期细胞分化过程中基因表达调控有关,还有待更多的研究证实。