论文部分内容阅读
目的了解黄芪注射液穴位注射对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子（IFN-γ/IL-4）水平以及磷酸化p38MAPK（mitogen－activated protein kinase，MAPK）的影响，探讨黄芪穴位注射对哮喘大鼠气道炎症反应的影响和作用机制，为临床推广应用提供理论依据。方法1.将SPF级SD大鼠40只随机分为4组，每组10只：A组正常组（空白组），B组哮喘组（模型组），C组地塞米松腹腔注射组（西药对照组），D组黄芪注射液穴位注射组（实验组）。2.实验第1天和第8天： B，C，D组予腹腔注射1ml卵清蛋白（OVA）和氢氧化铝（Al(HO)3）混合液（含OVA和Al(HO)3各100mg）进行致敏，A组腹腔注射1ml生理盐水（NS）和Al(HO)3混合液。3.第14至28天：用含2%OVA溶液对B，C，D组超声雾化（30min/天），雾化时将大鼠放置于密闭盒中；A组以NS代替OVA。4.第19至28天：在每次雾化前30min，予D组大鼠肺俞穴和肾俞穴注射黄芪注射液，每天1次，0.15ml/穴；C组用50%地塞米松溶液按0.5ml/kg剂量腹腔注射，A、B组用NS（0.5ml/kg）腹腔注射。5.第28天雾化后24小时取大鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）以及肺组织，应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和BALF中IFN-γ、IL-4水平；对肺组织进行切片、HE染色，用蛋白质印迹和免疫组化法测肺组织磷酸化p38MAPK表达情况。结果1.大鼠肺组织中磷酸化p38MAPK水平western-blot结果：哮喘组与其他各组比较，磷酸化p38MAPK水平升高（p＜0.05）；黄芪组与地塞米松组比较，磷酸化p38MAPK水平降低（p＜0.05）。黄芪组与正常组比较，磷酸化p38MAPK水平升高（p＜0.05）。2.大鼠血清及BALF中IFN-γ、IL-4水平：哮喘组与其他各组比较：血清及BALF中IFN-γ表达水平降低，IL-4表达水平升高（p＜0.05）；黄芪组与地塞米松组比较：血清及BALF中IFN-γ表达水平降低（p＜0.05），而IL-4表达水平升高（p＜0.05）。3.相关性分析：肺组织中磷酸化p38MAPK含量与血清IFN-γ含量呈负相关（r=-0.641，p＜0.01），与血清IL-4含量呈正相关（r=0.555，p＜0.01），与BALF中IFN-γ含量呈负相关（r=-0.670，p＜0.01），与BALF中IL-4含量呈正相关（r=0.704，p＜0.01）。4. HE染色：哮喘组大鼠气道黏膜水肿、淋巴细胞浸润明显，黄芪注射液穴位注射组和地塞米松组与哮喘组比较，气管粘膜上皮细胞增生和淋巴细胞浸润情况减少，气道水肿情况减弱。免疫组化结果显示：磷酸化p38MAPK主要在支气管上皮细胞核和肺泡上皮细胞核表达，在哮喘组呈强阳性，表达高于其他各组（p＜0.05）。黄芪组和地塞米松组对比无明显差异（p=0.143），但两组都强于正常组（p＜0.05）结论黄芪穴位注射可减轻哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4的平衡失调，减轻气道炎症，可能是其治疗哮喘的作用机制之一。黄芪穴位注射可降低磷酸化p38MAPK表达，从而影响哮喘发病过程中炎症介质的产生。黄芪穴位注射降低磷酸化p38MAPK表达的效果与地塞米松相似或略强于地塞米松，对IFN-γ/IL-4的平衡失调的纠正作用弱于地塞米松，但仍需进一步研究验证。