论文部分内容阅读
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutoecarpa(Juss.) Benth.、石虎E.rutaecarpa (Juss.) Benth. var. officinalis (Dode) Huang或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa (Juss.) Benth. var. bodinieri (Dode) Huang的干燥近成熟的果实。吴茱萸始载于《神农本草经》,是贵州省著名的道地药材。吴茱萸味辛性热,具有“温通心阳”的作用,为临床上常用的温中散寒药。几千年来,中医认为辛热药物具有药效显著、药力较猛、归经以五脏的心、肝、肾为主的药性特点。本实验在详细地研究总结了前人的研究基础上,以贵州余庆GAP种植基地产疏毛吴茱萸为代表,本着传统、简单、易重现的原则,对其“温通心阳”功效的物质基础进行了探索性研究。研究结果如下：1、疏毛吴茱萸药材的水、醇提取工艺优化。分别采用正交试验设计优选疏毛吴茱萸水提取、醇提取的工艺条件,研究表明：疏毛吴茱萸水提物制备的最佳工艺条件为：用10倍量水,煎煮3次,每次煎煮120分钟,疏毛吴茱萸醇提物制备的最佳工艺条件为：用6倍量60%的乙醇回流提取3次,每次120分钟。通过HPLC含量测定对比、TLC图谱鉴定、HPLC特征图谱比较的方法,对疏毛吴茱萸水提物、醇提物的干燥方法的考察,结果表明：减压干燥、微波干燥、冷冻干燥对提取物的质量无显著性影响,因此可从节能、减耗、省时等多方面根据实际情况,选择适宜的干燥方法。2、疏毛吴茱萸水、醇提取物HPLC特征图谱研究。对吴茱萸水、醇提取物HPLC特征图谱进行了系统研究,建立了吴茱萸提取物的特征图谱方法：色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,采用流动相二元梯度洗脱系统(时间：0 min～5min～38 min～65min,乙腈比例：5%～5%～23%～100%),流速为1mL·min-1,检测波长为258nm,柱温30℃。该指纹图谱方法经方法学考察,精密度、稳定性、重复性良好,同时标示出吴茱萸醇提物20个特征峰和水提取物19个特征峰。3、液质联用技术对疏毛吴茱萸提取物特征图谱中色谱峰的定性分析。采用电喷雾电离-串联质谱的方式建立了UPLC-MS/MS分析方法,在已有文献基础上,参考吴茱萸所含有的化合物的色谱行为以及质谱的裂解规律,通过优化二元梯度洗脱及质谱的性能参数,鉴定了其中8个活性成分,分别是绿原酸及其异构体、槲皮素-3-0-β-D半乳糖苷、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、14-甲酰基二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱。液质联用能快速、准确地鉴定疏毛吴茱萸提取物主要有效成分,丰富了特征图谱反映的化学信息,也为更好地阐明中药作用的物质基础和作用机制提供一定的依据。4、疏毛吴茱萸水、醇提取物化学成分和生物活性比较及“温通心阳”类药物特征图谱比较。疏毛吴茱萸水、醇提取物总生物碱的转移率分别为5.45%和71.22%；另外,在疏毛吴茱萸水提物、醇提物和药材的HPLC特征图谱比较中发现,水、醇提取物特征图谱与药材的特征图谱相似度为分别为0.545%和0.933%,两种结果均表明,醇提物对于药材的化学成分保留较水提物好。通过水提物、醇提物的HPLC特征图谱的比较,我们发现,不同极性的提取部位峰面积有一定的差别。通过三种“温通心阳”药物(吴茱萸、附子、干姜)的水提物HPLC图谱比较我们未发现有共同的色谱峰,初步证明它们没有共同的作用物质。通过进一步的药效筛选实验也表明,醇提物对于大鼠左心室内压和心律的促进作用大于水提物,证实了醇提物质量优于水提物,此结果为疏毛吴茱萸有效部位的进一步定位奠定了基础,也为临床用药方式提供了有力的参考价值。