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果实特异启动子对于利用植物基因工程改良果实品质性状至关重要。分离柑橘果实特异性启动子并分析其功能对研究柑橘果实成熟的分子机制以及利用生物技术提高果实品质均有重要的意义。目前还尚未有分离获得柑橘果实特异启动子的报道,本研究在前期利用Genome Walking技术分离了柑橘果实特异基因CsPMEI的5’上游1137bp启动子区域及构建了分别包含三个不同启动子功能区域驱动intron-GUS的双元表达载体的基础上,建立了适于Micro-Tom番茄的GUS组织化学染色体系,利用瞬时表达技术初步分析了不同启动子区域驱动GUS基因在番茄各组织器官中的表达调控,通过优化Micro-Tom番茄潮霉素遗传转化体系,并成功获得转化待测启动子的转基因番茄植株,通过GUS染色进一步鉴定该启动子的功能。主要研究结果概括如下:(1)GUS染色体系的建立为消除Micro-Tom番茄各组织器官本身内源GUS活性对GUS染色结果的干扰,本研究通过筛选不同pH值的磷酸缓冲液处理外植体,确定最适缓冲液pH为7.2。(2)瞬时表达初步分析目标启动子功能利用农杆菌介导的瞬时表达法将不同目标启动子区域驱动GUS基因转化Micro-Tom番茄的各组织器官,初步分析不同启动子区域的表达调控。根据染色结果初步判断,CsPMEI启动子-334~-1137区域具有果实特异性调控功能,这一结果有待于通过稳定表达分析进一步验证。(3)优化Micro-Tom番茄抗潮霉素的遗传转化体系。通过筛选潮霉素浓度,试优化了Micro-Tom番茄抗潮霉素的遗传转化体系。以苗龄10d的Micro-Tom番茄子叶和下胚轴为外植体,农杆菌侵染浓度为0.1(OD600),浸染时间为15min,共培养36h后外植体转移至潮霉素浓度为10mg.L-1的培养基中进行筛选,最终获得18株抗性植株,转化率为10.8%。(4)稳定表达鉴定目标启动子功能利用PCR技术对抗性植株进行检测,结果18株抗性植株均有目的条带扩增。利用GUS组织化学染色分析待测启动子在转基因番茄各个组织器官中的表达调控,结果表明:CsPMEI启动子-334~-1137区域能够驱动GUS报告基因在番茄成熟果实中特异表达,与瞬时表达分析结果相符。