本研究根据人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂(HuPSTI)的氨基酸序列，选用毕赤酵母偏好密码子人工设计合成了HuPSTI的全基因序列，克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中，构建了分泌型表达载体pPIC9K-PSTI，用SacI线性化载体，采用电激法转化毕赤酵母KM71，得到的His菌株再用G418筛选抗性克隆，然后进行摇瓶表达，探讨了在不同pH条件下进行诱导以及不同甲醇浓度对HuPSTI表达量的影响。 　　鉴于适合高密度发酵表达的特点，本研究还对重组表达菌株KM71(pPIC9K-PSTI)进行发酵工艺摸索，研究了发酵pH值，诱导碳源和诱导时间对HuPSTI的表达量的影响。结果表明，当培养基pH为6.0时，诱导碳源为甲醇+甘油时，可获得高表达量的HuPSTI蛋白。发酵上清经采用阴离子交换层析(QSepharoseXL)和分子筛层析(SepherdexG50)可纯化出HuPSTI目的蛋白，100ml发酵上清可获得90mg电泳纯的HuPSTI，比目前所知的重组HuPSTI的最高表达量提高了18倍。蛋白N端测序结果表明本研究获得的重组HuPSTI具有两种结果：一种是与原蛋白序列一样(rHuPSTI)，另一种是在N端多出两个氨基酸EA(rHuPSTI，)。虽然两种蛋白有两个氨基酸的差别但它们的活性几乎完全相同。本研究还对重组HuPSTI的性质进行了分析，酶活测定表明纯化的1mgHuPSTI可以抑制3.4-3.8mg牛胰蛋白酶(Trypsinfrombovinepancreas，6630U/mg，Sigma)。并对其的最适反应温度和pH进行了分析，分析表明，在与人体内环境相似的pH环境和温度下，重组的HuPSTI都具有较高的抑制胰蛋白酶的活性。