论文部分内容阅读
目的: 研究条件增殖腺病毒介导的IL-24及Ki-67基因RNAi对人肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。
方法: 培养人肝癌细胞株7402、膀胱癌细胞株BIU-87，将不同MOI的ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP感染两种肿瘤细胞株，分别于不同时间收集肿瘤细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-24及Ki-67 mRNA表达；蛋白印迹(Western blot)和免疫组化法检测条件增殖腺病毒E1A、IL-24及Ki-67蛋白表达；结晶紫染色观察细胞毒效应：MTT检测细胞增殖；TNUEL检测细胞凋亡。
结果:
1.10MOI、48h处理条件下，蛋白印迹(Western blot)及免疫组化法证实ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP组中均表达E1A蛋白，表明携带IL-24及Ki-67 RNAi的条件增殖腺病毒可在人肝癌细胞株7402及膀胱癌细胞株BIU-87中复制。
2.10MOI、48h处理条件下，RT-PCR检测ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP组发现：(1) 仅ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24组表达IL-24mRNA，两种处理组的灰度分析比值7402细胞为1:2.1、BIU-87细胞为1:2.5，以ZD55-IL-24组表达量最大；(2) 与对照组相比，ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP处理组Ki-67mRNA表达均降低：7402细胞为(65.6±3.2)％ vs (80.3±2.1)％ vs (36.3±3.4)％ vs (86.8±1.9)％，BIU-87细胞为(52.7±1.8)％vs(72.9±2.9)％vs(31.3±1.6)％vs(78.9±2.5)％，Ki67 mRNA表达量依次为ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-Ki67。
3.10MOI、48h处理条件下，Western blot检测ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP组发现：(1) 仅在ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24组表达IL-24蛋白，灰度分析比值7402细胞为1:1.7，BIU-87细胞为1:1.9；(2) 与对照组相比，各组的Ki-67蛋白表达均降低，7402细胞为(61.7±1.8)％vs(81.3±2.5)％vs(39.6±3.1)vs(88.2±1.6)％，BIU-87细胞为(50.6±2.6)％vs(76.3±1.7)％vs(34.5±2.4)％vs(82.6±1.9)％，Ki67蛋白表达依次为ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-Ki67。
4.10MOI、48h处理条件下，免疫组化法检测ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-1067、ZD55-EGFP组发现：(1) 仅在ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24组IL-24蛋白呈阳性表达，7402细胞为(30.9±3.2)％vs(50.4±2.3)％，BIU-87细胞为(32.8±1.6)％vs(54.2±2.5)％；(2) 与阴性对照相比，各组的Ki-67蛋白表达阳性率均降低，7402细胞为(73.2±1.6)％vs(87.5±1.9)％vs(41.6±2.6)％vs(90.9±1.5)％，BIU-87细胞为(54.6±2.0)％vs(78.2±42.8)％vs(38.5±2.9)％vs(87.7±2.1)％，Ki67蛋白表达阳性率依次为ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-1067>ZD55-1067。
5.MTT显示不同处理组对7402、BIU-87细胞增殖抑制作用依次为ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-IL-24>ZD55-Ki67>ZD55-EGFP。
6.TUNEL及结晶紫观察不同处理组诱导7402、BIU-87细胞凋亡能力依次为ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-IL-24>ZD55-Ki67>ZD55-EGFP。
结论: 携带IL-24及Ki-67 RNAi的条件增殖腺病毒可在肿瘤细胞中复制，联合两种携带不同靶基因的病毒能够更有效抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞凋亡。