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中枢神经系统(central nervoussystem,CNS)损伤后,髓鞘相关性轴突生长抑制因子Nogo-A、髓磷脂相关糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)、少突胶质细胞-髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte myelinglycoprotein,Omgp)共同作用于高亲和受体NgR,在p75NTR的参与下,激活内源性的Rho后通过活化下游的效应分子ROCK,使其作用底物肌球蛋白磷酸酶磷酸化,从而影响细胞微结构的骨架肌动蛋白系统,最终抑制轴突生长。为了研究特异性shRNA-ROCK-Ⅱ对ROCK-Ⅱ基因表达的抑制和对轴突再生修复的作用,在体外和体内中分别进行了实验研究。体外试验中,将构建的小发夹片段RNA (small hairpin RNA,shRNA)与质粒结合后,通过脂质体介导转染自行培养并纯化、鉴定正确的少突胶质细胞后,应用RT-PCR、免疫组化方法检测ROCK-Ⅱ基因沉默效果,并对转染后的细胞在特定的时间点进行流式细胞术检测细胞生长周期情况。结果表明,体外构建的特异性shRNA-ROCK-Ⅱ有效地沉默了ROCK-Ⅱ基因表达。体内实验中通过制作的大鼠脊髓损伤模型进行分组研究,根据体外实验中观察到的转染后基因抑制的有效时间点,在mRNA水平和蛋白表达水平对ROCK-Ⅱ基因的表达进行评价,特异性shRNA-ROCK-Ⅱ抑制了损伤脊髓组织中的ROCK-Ⅱ基因的表达,同时脊髓损伤后轴突再生特异性生长标志物GAP-43蛋白的表达上调,进一步为说明神经细胞轴突具有再生的倾向提供了依据。实验证明,ROCK-Ⅱ基因的抑制与损伤后脊髓的轴突再生有正相关性,特异性shRNA-ROCK-Ⅱ抑制ROCK-Ⅱ基因的表达可以促进脊髓损伤的轴突再生。本实验利用小干扰RNA(small or short inferenceRNA,siRNA)的有效性和特异性,有效抑制了ROCK-Ⅱ基因的表达,阻断了Rho-ROCK传导通路,抑制了NogoA、MAG、Omgp等轴突生长抑制因子的作用,为脊髓损伤的治疗提供了新的方法。