体外芬太尼和舒芬太尼对乳腺癌病人CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的影响

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目的:研究CD3/28抗体、IL-2与外周血单个核细胞(PBMCs)共培养时,不同浓度芬太尼及舒芬太尼对CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)比例的影响。以期了解与评价在体外不同种类阿片类药物对调节性T细胞的数量及功能的影响。方法:在24孔板的1个孔中0.5m1的PBS中加入0.5μg的CD3抗体、1μg的CD28抗体,4℃包被过夜后吸尽,用PBS洗两遍以上,待用。分别取10名健康对照组和12名乳腺癌组20m1新鲜血,分离外周血单核细胞,大概取106个细胞直接染色,上机检钡CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)比例;剩余的细胞用7m1含20%胎牛血清、1%双抗、100U/m1的IL-2的1640重悬,计数后平均分到7个包埋好抗体的孔中。第1孔作为对照组不加药,于第2-7孔中分别加入不同浓度3μg/L(F1)、30μg/L (F2)、300μg/L (F3)的芬太尼和0.3μg/L (S1)、3μg/L (S2)、30μg/L (S3)舒芬太尼。第7天计数取0.5-1*106个细胞CD4PE-Cy5/CD25PE、Alexa Fluor(?)488anti-human Foxp3染色,上机检测。结果:乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占总CD4+T细胞的比例高于健康对照组;在体外芬太尼和舒芬太尼均能显著促进CD4+CD25+Foxp3+Treg的增殖。药物浓度越高CD4+CD25+Foxp3+Treg数量越多。且芬太尼组和舒芬太尼组内等效镇痛剂量一致的情况下比较,临床浓度组舒芬太尼组均值与芬太尼组无统计学意义,而10倍和100倍临床浓度组差异有统计学意义。且舒芬太尼组均值高于芬太尼组。结论:舒芬太尼和芬太尼在体外均具有免疫抑制效应;越高浓度的芬太尼、舒芬太尼免疫抑制更强,而等效剂量时,舒芬太尼则更能促进调节性T细胞增殖。
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