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第一部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护性作用目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(Tanshinone IIA sodium sulfonate,TSS)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤(Acutelunginjury,ALI)的保护性作用。方法雄性C57BL/6小鼠108只,体重25-30g,随机分成3组,每组36只:对照组(control组)(n=36):予以腹腔注射等体积生理盐水;LPS组(n=36):采取单次腹腔注射LPS10mg/kg建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;LPS+TSS组(n=36):采取预先腹腔注射TSS 30 mg/kg,30min后腹腔注射LPS10 mg/kg。分别于注射生理盐水或LPS1h、6h、12h时处死小鼠,每个时间点处死12只小鼠,留取肺组织待检。测定肺组织的湿干比(W/D),HE染色后评估肺损伤程度及炎症细胞浸润情况。结果对照组肺泡结构完整,肺泡间隔均匀一致。LPS组肺组织表面充血水肿,肺泡结构破坏,肺泡间隔增宽,部分肺泡腔可见渗出、出血。肺组织湿干比(W/D)方面,与对照组比较,LPS组在1h、6h、12h较对照组明显升高(P<0.05),LPS+TSS组在1h、6h明显升高(P<0.05),至12h较对照组无显著差别(P>0.05);与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠预处理后在1h、6h、12h均能够显著降低肺水肿。炎症细胞浸润方面,与对照组相比,LPS刺激后在1h、6h炎症细胞浸润数量较对照组有显著差别(P<0.05),12h已无差别(P>0.05);给予丹参酮ⅡA磺酸钠预处理后在1h、6h明显降低炎症细胞浸润数量(P<0.05)。结论腹腔注射LPS10mg/kg成功建立了急性肺损伤模型;丹参酮Ⅱ A磺酸钠预处理能够明显减轻LPS致ALI肺泡结构破坏程度、肺水肿,炎症细胞浸润数量,发挥了肺保护性作用。第二部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α及炎症因子的影响目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(Tanshinone ⅡA sodium sulfonate,TSS)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤缺氧诱导因子(Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)及炎症因子的影响。方法雄性C57BL/6小鼠108只,体重25-30g,随机分成3组,每组36只:对照组(control组)(n=36):予以腹腔注射等体积生理盐水;LPS组(n=36):采取单次腹腔注射LPS10mg/kg建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;LPS+TSS组(n=36):采取预先腹腔注射TSS 30 mg/kg,30min后腹腔注射LPS10 mg/kg。分别于注射生理盐水或LPS 1h、6h、12h时处死小鼠,每个时间点处死12只小鼠,留取肺组织待检。采用实时聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot法)检测肺组织中HIF-1α的表达情况。采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay kit,ELISA)和RT-PCR法检测肺组织中促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和抑炎因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)的表达情况。结果与对照组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织在1h、6h、12h时HIF-1α、促炎因子TNF-α IL-1β、IL-6和抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白质水平均明显上调(P<0.05)。LPS刺激后肺组中HIF-1α mRNA和蛋白水平均在6h达到峰值后下降。TNF-α、IL-1β mRNA和蛋白质,IL-6和IL-10 mRNA在1h时明显升高,至6h开始出现下降。与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠在LPS刺激后6h和12h显著降低HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达。对于炎症因子方面,丹参酮ⅡA磺酸钠在LPS刺激后1h、6h、12h时能明显抑制TNF-αmRNA、IL-6 mRNA和蛋白质、IL-1β mRNA的表达水平,在12h时上调IL-10 mRNA和蛋白质的表达水平。结论丹参酮ⅡA磺酸钠通过抑制LPS诱导ALI肺组中HIF-1α,促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,和上调抑炎因子IL-10的表达,起到肺保护性作用。第三部分 HIF-1α对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤炎症因子的影响目的探讨HIF-1α对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤炎症因子的影响。方法雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组(n=12):腹腔注射等体积生理盐水;LPS组(n=12):单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+HIF-1α抑制剂(2ME2)组(n=12):预先腹腔注射HIF-1α抑制剂(2ME2)(20mg/kg),30min后腹腔注射LPS 10mg/kg。在注射生理盐水或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。测定肺组织的湿干比(W/D),HE染色后评估肺损伤程度。采用ELISA和RT-PCR法检测肺组织中促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和抑炎因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)的表达情况。结果与对照组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白质水平均明显上调(P＜0.05)。与LPS组比较,LPS+2ME2组中肺组织结构破坏程度减轻,肺水肿减轻,促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白质水平明显下调(P<0.05),但是抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白水平改变不明显(P>0.05)。结论抑制HIF-1α表达后可改善LPS诱导小鼠ALI肺水肿和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,起到肺保护性作用。第四部分 丹参酮ⅡA磺酸钠通过PI3K/AKT信号通路对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α的影响目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(Tanshinone ⅡA sodium sulfonate,TSS)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α的影响机制。方法实验1:TSS对LPS诱导小鼠急性肺损伤PI3K/AKT信号通路的影响雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组(n=12):腹腔注射等体积生理盐水;LPS组(n=12):单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+TSS组(n=12):预先腹腔注射 TSS(30mg/kg),30min后腹腔注射LPS(10mg/kg)。在注射NS或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。采用Western-blot法检测肺组织中PI3K和p-Akt/Akt的表达情况。实验2:PI3K抑制剂(LY294002)对LPS诱导急性肺损伤HIF-1α的影响雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组(n=12):腹腔注射等体积生理盐水;LPS组(n=12):单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+PI3K(phosphatidyIinositide 3-kinases)抑制剂(LY294002)组(n=12):预先腹腔注射PI3K抑制剂LY294002(30mg/kg),30min后腹腔注射LPS 10mg/kg。在注射NS或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。采用RT-PCR和Western blot法检测肺组织中HIF-1α的表达情况。结果对照组中PI3K、p-Akt/Akt呈低水平表达。与对照组比较,LPS组PI3K、p-Akt/Akt明显升高。与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠能够明显抑制肺组织中PI3K蛋白表达、及Akt的磷酸化水平。与LPS组比较,PI3K抑制剂(LY294002)能够明显抑制ALI肺组织中HIF-1 α mRNA和蛋白水平表达。结论丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过PI3K/Akt途径抑制了 HIF-1α的表达,起到了肺保护性作用。