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目的 观察在核因子κ B受体活化子配体(RANKL)的作用下，类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)滑膜CD68~+细胞在体外分化的特性，探讨RA滑膜CD68~+细胞与前体破骨细胞的关系。 材料和方法 1．取6例RA和6例正常关节的滑膜组织，胶原酶消化法获得滑膜细胞，用免疫磁珠法筛选滑膜CD68~+和CD68~-细胞。流式细胞仪检测筛选效能；CD68抗体免疫组化染色观察RA和正常关节滑膜组织筛选前后滑膜CD68~+细胞所占比例。MTT法观察筛选后细胞增殖活性。 2．将筛选获得的RA和正常滑膜CD68~+和CD68~-细胞分别直接用外源性的RANKL诱导分化，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、降钙素受体免疫荧光检测、骨吸收陷窝形成等方法鉴定诱导分化后的滑膜细胞。 3．在RA滑膜CD68~+细胞培养液中加入0ng／ml到8ng／ml不同梯度浓度的RANKL，观察不同浓度RANKL对RA滑膜CD68~+细胞分化的影响。 结果 1．免疫组化染色结果表明筛选前RA滑膜CD68~+细胞比例较正常滑膜CD68~+细胞高(P＜0.01)，经免疫磁珠法筛选获得滑膜CD68~+细胞纯度为93.6％。各组细胞筛选后体外均有增殖活性。 2．RANKL在体外对正常关节滑膜CD68~+细胞、CD68~-细胞和RA滑膜CD68~-细胞无诱导作用，降钙素受体染色阴性、TRAP染色阴性、无 骨吸收陷窝形成。RA滑膜CD68+细胞在RANKL诱导后7d，RA滑 膜CD68十细胞降钙素受体染色阳性、TRAP染色阳性，且有明显骨吸 收陷窝形成。3.体外RANKL影响RA滑膜CD68+细胞分化功能。在培养液中RANKL 浓度Ong/ml组和ing/m1组，骨片无骨吸收陷窝形成。RANKL浓度 为4ng/nil组，骨吸收陷窝面积为509.73*84.58林mZ，与Zng/ml组相 比311.32士54.3一林扩，具有显著差异(P<0.05)。sng/ml组骨吸收陷窝 面积为676.05*92.58林mZ，与4ng/m一组相比具有显著差异(P<0.05)。结论1.RA滑膜CD68+细胞是前体破骨细胞的来源。2.RANKL在体外可以诱导RA滑膜CD68+细胞分化为破骨细胞。