聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸纯化及降解产物活性研究

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随着科技的不断发展,高纯度的甘露糖醛酸(M)和古罗糖醛酸(G)越来越多地被应用于药物制剂、临床医疗、化妆品等领域。但现有提取方法提取出的M、G含量最高在90%左右,且多为寡糖,达不到科研的要求,使许多研究面临瓶颈。因此,急需对较高分子量且高纯度聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸提取方法进行研究,为褐藻胶的精深加工提供新工艺,从而提升我国褐藻胶工业的国际竞争力。在前人研究的基础上,针对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸纯品的制备技术进行了研究并对其系列低聚糖的活性进行了初步探讨。1.探讨了Dowex强阴离子交换柱流动相及洗脱浓度的选择。以HAc、NaCl等作为洗脱剂对上样后的交换柱进行线性洗脱。结果得出,0.5mol·L-12.0mol·L-1浓度梯度的HAc为洗脱剂可将甘露糖醛酸和古罗糖醛酸很好的洗脱下来达到分离的目的。甘露糖醛酸在醋酸浓度为0.995mol·L-1左右时被集中洗脱,根据总糖标准曲线计算其得率34.09%;古罗糖醛酸在醋酸浓度为0.8mol·L-1左右时被集中洗脱,得率为59.06%。2.利用高效液相色谱及核磁共振技术对制得的聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸样品进行分子量及纯度的测定。结果得出PM、PG的分子量分别为MW(PM)=11930.66Da(聚合度约为60),MW(PG)=10741.61Da(聚合度约为54)。经HPLC离子交换色谱柱后,两种聚糖的谱图均呈现单峰,且峰型对称,说明其纯度已达到很高水平。结合核磁共振技术对其结构及纯度的进一步测定得出,1H-NMR谱图中PM、PG信号峰均与文献报道吻合,由此试验所得到的分离物确证为聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸,且其分子保持了原褐藻胶大分子中甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的特有结构特征。其中,PM谱图中有微小含量的PG存在,这可能是由于PM的柔性所引起的,但两种聚糖纯度均可达到95%以上。3.研究了褐藻胶系列低聚糖对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除效果及脂质过氧化的抑制效果。将制得的大分子聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸溶解并调pH于高温下降解后,利用超滤装置将其按分子量等级分为MW<1000,1000<MW<3000,3000<MW<5000及MW>5000四个组份,并对其进行抗氧化活性研究。结果显示,褐藻胶系列低聚糖对两种自由基均有很好的清除作用,且在试验浓度范围内的清除作用随着低聚糖浓度的增加而逐渐加强。随着分子量的升高,系列低聚糖的自由基清除能力逐渐降低,且相同分子量范围的M和G低聚糖对两种自由基的清除能力大致相同。在脂质过氧化抑制试验中,在试验浓度范围内(00.2mg/mL),褐藻胶系列低聚糖对脂质过氧化有较好的抑制作用,且抑制能力与其各自的浓度均呈正相关关系。与自由基清除试验结果相反,褐藻胶系列低聚糖对脂质过氧化的抑制能力随着分子量的升高而逐渐增强。
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