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目的:本文研究传统中药土槿皮有效成分土槿乙酸(Pseudolaric acid B,PB)对NC/Nga小鼠特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:1体内研究1.1 PB对NC/Nga小鼠AD的药效学研究灌胃给药观察不同剂量的PB(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)对NC/Nga小鼠AD作用后的皮损炎症评分、体重变化、脾脏指数、血清Ig E含量,H&E染色检测皮肤组织病理学变化。1.2 RT-PCR法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠脾脏及皮肤组织中T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4、ASC、caspase-1、IL-1β、NLRP3、PPAR-γ、PPAR-δ、TLR-2、TLR-4、IL-17a、IL-17Ra、IL-22m RNA基因表达的影响。1.3 ELISA法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠血清Ig E和相关细胞因子IL-1β、IL-17和IL-22含量的影响。1.4 Western-blot法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠脾脏磷酸化AKT(Ser473)、RSK-2及磷酸化ⅠκBα(Ser32/Ser36)蛋白表达的影响。2体外研究2.1 MTT法检测PB体外对小鼠胸腺和脾脏细胞的毒性及对淋巴细胞增殖抑制作用。MTT法测定PB在体外对小鼠胸腺和脾细胞的毒性作用,并分析刀豆蛋白A(Con A)及脂多糖(LPS)诱导的小鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖抑制作用。2.2荧光素酶报告基因检测PB对转染报告基因质粒的RAW264.7细胞PPAR-γ转录激活。结果:1不同剂量PB(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)灌胃给药后,中、高剂量组明显改善NC/Nga小鼠的体重下降、脾指数升高;H&E染色显示中、高剂量组能明显减轻NC/Nga小鼠的表皮增厚和水肿,减少炎症细胞浸润,以上证明PB对NC/Nga小鼠AD具有显著的治疗作用。2 RT-PCR和ELISA结果显示PB能够下调炎症因子TNF-α及炎症小体NLRP3、IL-1β、Caspase-1的基因表达;抑制IL-22和IL-17a的表达和分泌;同时促进PPAR-γ和PPAR-δ基因表达;抑制TLR-2和TLR-4基因的表达以及NF-κB通路信号分子Ⅰ-κBα的活性表达;此外,PB还能明显抑制AKT活化及RSK-2表达,通过多个作用靶点,从而调节机体免疫-炎症反应网络。3 MTT法检测发现,PB在体外对小鼠胸腺和脾淋巴细胞无明显的细胞毒性,IC50>1mmol/L,优于阳性药霉酚酸酯(23.22μmol/L),呈现时间-剂量依赖性地抑制Con A诱导的T细胞增殖,同时,对LPS诱导的B淋巴细胞增殖亦表现出一定程度的抑制作用,但其效应低于阳性对照药,提示PB可能选择性抑制T细胞活化增殖。荧光素酶报告基因分析,PB能够激活RAW264.7细胞中的PPAR-γ转录活性,上调PPAR-γ表达。结论:PB对NC/Nga小鼠AD有良好的治疗效果,能够通过抑制IL-1β、TNF-α、Caspase-1、TLR-2/TLR-4基因表达,降低IL-22和IL-17分泌发挥作用,其机制可能与抑制淋巴细胞活化增殖、PPAR-γ转录激活,以及下调PI3K/AKT/NF-κB信号通路有关,且其毒性显著低于阳性药。因此,PB是具有良好的抗炎免疫抑制活性的中药单体,有望开发成具有自主知识产权新型药物用于治疗AD,具有广阔的研究前景。