论文部分内容阅读
目的：1研究野生型小鼠和阿尔茨海默氏症（Alzheimer’s Disease, AD）模型小鼠的体外培养海马神经元的突触发育过程中，硫化八肽缩胆囊素（sulfated cholecystokinin octapeptide,CCK-8S）对神经元树突丝、树突棘发育的影响。2研究CCK-8S是否通过CCKⅡ型受体(Cholecystokinin-2type receptors, CCK-2R）介导的途径影响神经元突触发育。3探寻CCK-8S在海马神经元发育过程中的作用和作用机制，为阿尔茨海默病的发病机理研究提供新实验依据。方法：新生第一天AD模型（APP/PS1转基因）小鼠和野生型小鼠经PCR鉴定后，分别对其进行海马取材，体外培养神经元。从体外培养第2天（DIV1）开始，用药物进行处理，分为四组：空白对照组、CCK-8S（0.2μM）处理组、CI988（0.1μM）、CCK-8S（0.2μM）&CI988（0.1μM）共处理组，一直培养到第21天（DIV21）。选取三个时间点进行观察研究，分别为DIV7、DIV14、DIV21，每次观察前，提前24h用绿色荧光蛋白启动子腺病毒（CMV-GFP）进行转染，使神经元表达绿色荧光蛋白，以显示神经元树突丝、树突棘等形态学细节。然后通过活细胞成像方法，观察并获取DIV7、DIV14、DIV21的不同阶段的海马神经元的形态图像。对神经元形态图像用ImageJ软件进行分析处理，分析不同组间神经元的树突丝、树突棘的密度变化。结果：1在体外培养第7天（DIV7），AD模型小鼠的神经元树突丝密度较野生型小鼠显著性降低，CCK-8S(0.2μM)处理能够使神经元树突丝密度显著性增加，使野生型小鼠的树突丝密度在原有水平上显著性增加，使AD模型鼠的树突丝密度恢复到野生型小鼠的正常水平。2在DIV14、DIV21，AD模型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度较野生型小鼠显著性降低；研究发现CCK-8S(0.2μM)处理能够使AD模型小鼠和野生型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度显著性增加，且对AD模型鼠的作用更加显著。3研究CCK-8S（0.2μM）&CI988（0.1μM）共处理对神经元的突触发育的影响，结果发现CI988能够阻断CCK-8S增加树突丝、树突棘密度的作用，在DIV7，DIV14和DIV21三个阶段皆是如此。4CI988（0.1μM）处理对AD模型小鼠和野生型小鼠的体外培养海马神经元的树突丝、树突棘密度无显著性作用，在DIV7、DIV14、DIV21三个阶段皆是如此。结论：在神经元体突触发育过程中，AD模型小鼠的神经元树突丝、树突棘密度减少反映了APP/PS1基因的表达会使树突丝、树突棘的发育受损；而CCK-8S能够使野生型小鼠的海马神经元的树突丝、树突棘密度增加，并且CCK-8S能够使AD模型小鼠的树突丝、树突棘密度恢复野生型小鼠正常水平，说明CCK-8S能够促进神经元突触的发育； CI988作为CCK-2R拮抗剂，单独对AD模型小鼠和野生型小鼠进行处理，对不同发育阶段的神经元树突丝、树突棘的生长发育无显著影响，但CI988能够阻断CCK-8S对神经元树突丝、树突棘生长发育的促进和保护作用，说明CCK-8S促进神经元的突触发育是由CCK-2R介导的。