目的用蛋白质组学技术寻找小鼠肝癌细胞H22分泌的蛋白质,并与正常成年小鼠原代肝细胞分泌的蛋白质比较,筛选出差异蛋白质。方法用无血清培养基培养小鼠肝癌细胞株H22和正常成年小鼠原代肝细胞,分别收集它们的培养上清液,经冷冻干燥,层析柱过滤和丙酮沉淀两步脱盐,用单向SDS-PAGE电泳和双向电泳分离其中蛋白质,硝酸银对凝胶染色,PDQuest软件进行图像分析。结果1.在体外成功培养正常成年小鼠原代肝细胞,光镜可见双核;电镜可见线粒体丰富,嵴呈板层状或车轮状,内质网丰富。2.单向SDS-PAGE电泳银染结果:小鼠肝癌细胞H22无血清培养上清液得到10条带,正常成年小鼠原代肝细胞无血清培养上清液得到7条带。小鼠肝癌细胞H22分泌的蛋白质分子量在100kD以下表达丰度较高的有8条带,正常成年小鼠原代肝细胞分泌的蛋白质分子量在100kD以下表达丰度较高的仅有2条带。3.双向电泳银染结果:小鼠肝癌细胞H22无血清培养上清液中得到蛋白质斑点337个,组内重复性为79 %;正常成年小鼠原代肝细胞无血清培养上清液中得到蛋白质斑点132个,组内重复性为72%;两种样品的蛋白质斑点均连续分布在等电点3-10范围内,分子量小于200kD以内。4.筛选出小鼠肝癌细胞H22无血清培养上清液中表达丰度较高蛋白质斑点187个、正常成年小鼠原代肝细胞无血清培养上清液中表达丰度较高的蛋白斑点61个。