一般认为,在植物病毒侵染宿主植株以后,主要是通过破坏细胞叶绿体结构进而影响叶绿素的积累和光合作用。本课题组前期的实验表明,百合无症病毒(Lily Symptomless Virus, LSV)单独感染百合植株外部症状不明显,且宿主植物生理指标、光合作用、叶绿体超微结构等受影响程度与百合斑驳病毒(Lily mottle virus, LMoV)感染相比危害较轻,为了证明LSV是否存在于叶绿体中,本研究通过对感染LSV的植株进行叶绿体提取、叶绿体总蛋白的提纯以及外壳蛋白(Coat Protein, CP)在叶绿体积累的分子检测三方面研究,以期弄清LSV的作用位点,进一步阐明LSV的致病机理。本研究分别以感染LSV和健康对照的东方百合“索邦”(Lilium oriental,’ Sorbonne’)的叶片为材料。LSV粒子的分离纯化首先采用PEG沉淀法粗提,然后采用蔗糖密度梯度离心法进一步分离纯化。通过电镜观察以及酶标仪分析,发现采用PEG沉淀法粗提病毒粒子浓度较低且杂质很多,而采用蔗糖密度梯度离心提纯法进一步提纯后,得到的LSV粒子浓度较高且杂质较少。LSV提纯粒子的OD260/OD280为1.331,符合纯品标准。所得LSV提纯粒子的浓度为0.328mg/mL,产量为鲜重每克叶片可提纯病毒粒子14.53μg。采用缓冲液抽提法和酶解法分别提取叶绿体,并对各自反应条件进行优化。缓冲液抽提法的优化方案如下：在抽提缓冲液中加入5%山梨醇,2500r/min蔗糖密度梯度离心获得的叶绿体产量最高,鲜重每克叶片完整叶绿体的叶绿素提取量为130.4mg。酶解法的优化方案如下：4℃低温处理百合叶片24h,向CPW盐溶液中加入0.5%果胶酶、20mmol/LMES、0.6mol/L甘露醇和1%纤维素酶酶解5h,得到叶绿体产量最高,鲜重每克叶片完整叶绿体的叶绿素提取量为182.7mg。将两种优化的方案结合起来,形成一套综合提取方案,以此种方法进行叶绿体提取,鲜重每克叶片完整叶绿体的叶绿素提取量为191.1mg。因此,综合法是提取百合完整叶绿体的最佳方案。本实验制备完整叶绿体的过程中用胰蛋白酶除去可能粘着在叶绿体外膜上的CP,排除了细胞膜外CP对实验结果产生影响的可能性,通过对感病百合叶绿体总蛋白SDS-PAGE电泳图谱和LSV-CP的Western blot结果的分析,发现LSV-CP存在于感病寄主的叶绿体中,并且怀疑可能对寄主植株的光合作用产生影响。通过进行叶绿素含量测定及荧光动力学分析,发现LSV对植株的侵染抑制了百合PS Ⅱ的光化学活性。