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目的本课题通过研究细胞信号转导信使磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（PKB/Akt）在卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞株中的表达和改变,以了解卵巢癌与PI3K/Akt信号转导通路的关系,有助于阐明PI3K和Akt与卵巢癌发生发展的关系,为肿瘤的早期诊断、抗肿瘤新药物的开发和寻找基因治疗靶点提供新的思路。此外本研究通过比较单用PI3K抑制剂LY294002、顺铂及联合两种制剂的治疗方案对SKOV3和SKOV3/DDP细胞株的作用,观察LY294002的抗肿瘤作用,以及与顺铂的协同治疗作用,旨在为制定更加有效的治疗方案提供实验依据,为筛选有效抗肿瘤药物并为晚期卵巢癌的临床治疗提供理论依据。方法1.采用MTT法测定SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长曲线、顺铂IC50值及PI3K抑制剂LY294002对细胞生长抑制作用及其对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。2.Western Blot免疫印迹法检测顺铂、LY294002对SKOV3和SKOV3/DDP细胞PI3K和Akt活性的影响结果1.细胞贴壁式生长,SKOV3细胞倍增时间为33.36小时,SKOV3/DDP细胞倍增时间为42.60小时;2.LY294002能够抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长。SKOV3细胞LY2940025μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、40μmol/l四个实验组,24小时抑制率分别为20.80±1.35%、31.56±0.86%、39.39±1.29%,51.47±0.87%;48小时抑制率分别为29.76±2.04%、33.81±1.50%、42.99±1.29%,54.45±1.04%;72小时抑制率分别为35.17±0.68%、39.31±0.92%、48.75±2.28%,62.42±2.12%。SKOV3/DDP细胞LY294002 5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、40μmol/l四个实验组,24小时抑制率分别为7.82±2.44%、12.25±0.39%、17.72±0.22%,31.17±2.49%;48小时抑制率分别为22.94±2.65%、34.13±2.14%、37.64±2.57%,53.42±2.07%;72小时抑制率分别为29.33±1.64%、39.04±1.38%、48.45±2.11%,60.20±3.89%;3.LY294002可以增强SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。SKOV3细胞中,LY294002 10μmol/l联合DDP干预时与单用DDP相比细胞抑制率差异有统计学意义;SKOV3/DDP细胞中,LY294002 5μmol/l联合DDP干预时与单用DDP相比细胞抑制率差异有统计学意义。SKOV3细胞顺铂IC50值为3.3094±0.1771μg/ml,LY294002 5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l,40μmol/l预作用后,顺铂IC50值分别为2.6815±0.0473μg/ml、2.4416±0.0138μg/ml、1.5865±0.1024μg/ml、1.0802±0.0621μg/ml,敏感性分别增加了18.97%,26.22%,52.06%,67.36%。SKOV3/DDP细胞顺铂IC50值为13.6307±0.9342μg/ml,LY294002 5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l,40μmol/l预作用后,顺铂IC50值分别为8.4017±0.5105μg/ml、7.6872±0.1927μg/ml、5.2926±0.1005μg/ml、3.1949±0.1941μg/ml,敏感性分别增加了38.36%,43.60%,61.17%,76.56%;4.SKOV3/DDP细胞比SKOV3细胞PI3K/Akt信号转导通路表达活跃,SKOV3细胞PI3K和Akt蛋白相对浓度值均低于SKOV3/DDP细胞。LY294002 5+DDP组、LY294002 10+DDP组、LY294002 20+DDP组、LY294002 40+DDP组,顺铂组与对照组相比,SKOV3/DDP细胞PI3K蛋白比SKOV3细胞分别高51.86%、54.38%、56.53%、59.58%、53.57%和45.61%;SKOV3/DDP细胞Akt蛋白比SKOV3细胞分别高38.34%、35.64%、41.62%、48.69%、47.90%和40.94%。SKOV3细胞中,PI3K蛋白在各实验组间的表达量不同（F=190.215,P＜0.05）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）,蛋白表达量与LY294002浓度呈负线性相关（r=-0.972,P＜0.05）;Akt蛋白在各实验组的表达量不同（F=143.998,P＜0.05）,蛋白表达量与LY294002浓度呈负线性相关（r=-0.986,P＜0.05）。SKOV3/DDP细胞中,SKOV3/DDP细胞PI3K蛋白在各实验组的表达量不同（F=190.215,P＜0.05）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）,蛋白表达量与LY294002浓度呈负线性相关（r=-0.987,P＜0.05）;Akt蛋白在各实验组的表达量不同（F=1085.682,P＜0.05）,蛋白表达量与LY294002浓度呈负线性相关（r=-0.986,P＜0.05）。结论1.PI3K特异性抑制剂LY294002能够抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞体外增殖,而且随着LY294002浓度及作用时间的增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞的抑制作用逐渐增强。2.随着LY294002浓度的增高,SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性逐渐增强,提示LY294002能够协同顺铂作用,抑制细胞增殖,增加SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。3.LY294002可抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞PI3K和Akt蛋白的表达。随着浓度的增加,PI3K和Akt蛋白表达抑制作用增强,提示LY294002可以通过抑制PI3K蛋白,竞争性地结合ATP位点,进而抑制Akt蛋白的活化,影响二者的表达,抑制肿瘤细胞生长,增强顺铂敏感性。