人发角蛋白因具有良好的生物活性和生物相容性,已广泛应用于组织修复、止血、细胞培养等领域。人发经提取后获得水溶性人发角蛋白,其是生物医药领域应用的基础,但不同类型人发角蛋白在提取过程中发生的化学反应,以及不同提取过程中人发角蛋白的变化尚未清楚。鉴于人发中含有十七种角蛋白,很难从其提取物中分离获得单一角蛋白,限制了提取过程中角蛋白变化规律的研究。而重组角蛋白具有组分单一、纯度高的特点,通过探究不同重组人发角蛋白在提取过程的变化是解析人发角蛋白提取规律的重要途径。基于此,本论文在分析人发提取物中各类型角蛋白含量和人发角蛋白同源性基础上,筛选出了三种I型（K31、K35、K38）和三种II型（K81、K84、K86）角蛋白作为研究对象,通过模拟以β-巯基乙醇为还原剂的还原反应,探究不同类型人发角蛋白在还原提取中的变化,再借助氧化法和酶解法处理重组人发角蛋白,分析不同提取方法对其变化反应的影响,进一步考察了不同类型重组人发角蛋白经还原处理后的细胞增殖活性,探究了重组人发角蛋白经不同处理对其细胞增殖的影响。本文主要的研究内容和结论如下:（1）获得了组分单一的重组人发角蛋白。通过人发中含量以及同源性差异,筛选出三种I型（K31、K35、K38）和三种II型（K81、K84、K86）角蛋白作为研究对象,借助原核表达获得组分单一重组人发角蛋白。SDS-PAGE结果表明重组角蛋白分子量与文献一致,且目的条带单一;FT-IR和CD研究发现重组人发角蛋白与提取角蛋白化学和二级结构相似。（2）阐明了不同类型重组人发角蛋白经还原处理后的变化规律。FT-IR和SDS-PAGE结果表明,还原处理后,角蛋白的化学结构均与还原处理前相似且分子量位于对应重组人发角蛋白的分子量附近。还原产率中,RK31收率最大,RK35最小,这可能取决于头、尾部非螺旋结构域的亲水性。接触角测量表明,还原处理前I型角蛋白亲水性高于II型;还原处理后,角蛋白的亲水性均增加,I型和II型已无明显区别。总巯基和二硫键含量在还原处理后均减少,且II型含量均低于I型。CD研究发现还原处理会使I型角蛋白无规则卷曲占比降低,II型角蛋白无规则卷曲占比增加,但RK86例外。（3）阐述了重组人发角蛋白经不同提取方法处理后的变化规律。FT-IR显示氧化处理后出现了磺酸基特征峰。产率分析发现,还原法较温和,提取率最高;氧化法在碱性角蛋白中有更高的产率;酶解法产率偏低,分子量最小。接触角测量发现亲水性均有一定程度增大,其中酶解法获得的角蛋白亲水性变化最小。总巯基和二硫键含量均显著下降,其中氧化法和酶解法相当且下降程度大于还原法。CD研究发现三种方法都可能使部分α-螺旋转变为无规则卷曲。（4）分析了不同类型人发角蛋白和不同提取方法处理后角蛋白的细胞增殖效果。细胞增殖结果发现不同类型角蛋白促进细胞增殖效果均大于空白对照组。还原处理前,RK81和RK84促进细胞增殖能力最佳;还原处理后,I型和II型角蛋白无明显差异。角蛋白浓度为25μg/m L时,I型角蛋白的亲水性或“有规则卷曲”占比增加及II型角蛋白的“有规则卷曲”占比增加可能促进细胞增殖;角蛋白浓度为1mg/m L时,RK35显著优于RK31和RK38,可能与其具有的粘附序列有关。RK31的三种处理中,ERK31无促进细胞增殖的效果,ORK31促进细胞增殖的作用最佳。RK81的三种处理中,ERK81结果最佳,RRK81相对较差。q PCR结果表明,RK81和ORK81促使PI3K的m RNA表达水平显著降低,Braf、MEK1、ERK2、Cyclin D1的表达水平显著升高,因此可能通过MAPK信号通路促进细胞增殖,并可能涉及调控CDK4/6-周期素D上升和PI3K相关通路抑制。综上所述,本论文基于重组人发角蛋白组分单一特性,探究了不同类型重组人发角蛋白在还原提取过程中的变化反应规律,以及不同提取方法对重组人发角蛋白化学变化的影响,进而研究了不同人发角蛋白对其细胞增殖的影响。本论文的完成不仅加深了对人发角蛋白提取机制的认识,还对人发角蛋白的提取方法选择具有一定的指导作用。