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Nestin是中间丝蛋白的一种，主要在中枢神经系统发育中的神经前体细胞/神经干细胞上表达，因此在基础和临床研究中它被广泛用于鉴定神经干细胞。成年哺乳动物视网膜中，Nestin阳性细胞主要位于睫状体无色素上皮部位，因此很多学者认为这些Nestin阳性细胞的存在是视网膜再生的基础。最近研究报导，鸡眼玻璃体腔注射NMDA后在Mnller细胞上出现Transtin的诱导表达，nanstin和Nestin属同一类的可以在神经干细胞上表达的中间丝蛋白，并推测病理情况下这些Mller细胞具有潜在神经干细胞的特性，同时办有研究表明人胎儿视网膜Mller细胞表达Nestin，由此我们设计了本实验，从Mller细胞发育，体外和体内三方面探讨Nestin和另一种中间丝蛋白GFAP在Mller细胞上的表达规律及意义。
第一部分中间丝蛋白在大鼠视网膜发育过程中的表达
目的：探讨中间丝蛋白Nestin和GFAP在大鼠视网膜发育过程中的定位及变化，中间丝蛋白与Mller细胞、神经节细胞和星形胶质细胞的关系及存在的意义。
方法：分别于大鼠生后0d，l，2，3，4，7，12和20w取大鼠眼球行矢状位冰冻切片，免疫荧光双标确定中间丝蛋自在视网膜中的细胞定位，Real-time PCR方法进行定量分析。
结果：
1、出生Od Nestin免疫阳性细胞贯穿神经视网膜的全层，主要定位于视网膜前体细胞放射状排列的细长纤维中，此时尚无明确的Mller细胞发生，此时在视网膜内侧出现GFAP阳性细胞。
2、生后1w出现表达GS的Mller细胞，这些细胞同时表达Nestin，不表达GFAP，GFAP阳性细胞仍然位于视网膜内侧。
3、生后2w至12w，Nestin在。Mller细胞上的表达逐渐减少直至消失，GFAP的表达没有显著变化，主要定位于星形胶质细胞。
结论：在生后大鼠视网膜中，分化中的Mller细胞表达Nestin，随视网膜发育日益成熟，Nestin表达逐渐减少，成年大鼠视网膜Mller细胞不再表达Nestin，从新生鼠至成鼠Mller细胞都不表达GFAP。
第二部分中间丝蛋白在培养的视网膜Mller细胞上的表达
目的：探讨中间丝蛋白Nestin和GFAP是否在体外培养的大鼠视网膜Mller细胞上表达及其意义。
方法：取生后7-12天新生鼠视网膜，参考文献体外培养Mller细胞鉴定并纯化，免疫荧光双标观察Nestin和GFAP是否在Mller细胞上表达。
结果：用GS鉴定体外培养的第四代Mller细胞纯度可达97﹪，所有Mller细胞均表达Nestin，阳性染色位于胞浆。培养的Mller细胞无GFAP阳性染色。
结论：所采用的方法可简单、快速地获得高纯度地Mller细胞。培养的Mller细胞表达Nestin，不表达GFAP。
第三部分中间丝蛋白在不同视网膜病变中的表达
目的：探讨中间丝蛋白。Nestin和GFAP在不同视网膜病变中的表达，随病情进展表达规律及其意义。
方法:制作青光眼、视神经横断和缺氧三种视网膜损伤动物模型，分别于相应时间点取材，从视网膜矢状位切片和视网膜铺片两个方位行免疫荧光双标探讨Nestin和GFAP在视网膜中的定位，并用Western blotting和Real-time PCR方法进行定量检测。
结果:
1、青光眼大鼠视网膜Mller细胞出现Nestin和GFAP的诱导表达，随病情进展其表达渐增强，并一直持续至术后3w。
2、视神经横断大鼠视网膜Mller细胞出现Nestin和GFAP的诱导表达，随病情进展其表达渐增强。
3、大鼠缺氧后视网膜Mllerr细胞出现Nestin和GFAP的诱导表达，立即给予高氧治疗后，Nestin和GFAP在Mller细胞上的诱导表达明显减弱，大鼠缺氧后星形胶质细胞上也出现Nestin的诱导表达，但给予高氧治疗后，Nestin在星形胶质细胞上的表达并没有明显减弱。
结论：病理情况下，Nestin和GFAP在Mller细胞上的诱导表达是视网膜损伤后Mller细胞的一种胶质化反应，Nestin和GFAP一样可以作为视网膜受损的一个敏感的标记指标，其诱导表达可能对视网膜神经节细胞起保护作用。