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糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种由于胰岛素分泌缺陷和(或)胰岛素作用障碍所致的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病。随着我国人口老龄化及生活方式的改变,糖尿病已成为动脉粥样硬化性心血管疾病(Atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)和ASCVD死亡的主要危险因素,也是导致失明、非创伤性下肢截肢、周围神经病变和终末期肾病的主要原因。糖尿病肾脏疾病(Diabetic kidney disease,DKD),既往称糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN),是指由糖尿病所致的慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD),是糖尿病主要的微血管并发症之一,DKD是终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)的重要病因,是遗传和环境因素共同作用的复杂疾病。文献报道国内2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者DKD患病率为10%~40%。DKD的风险因素包括高龄、性别、种族、长病程、高血糖、高血压、肥胖(尤其是腹型肥胖)、高盐饮食、血脂异常、肾毒物质、急性肾损伤、蛋白摄入过多等。虽然对影响糖尿病肾脏疾病的临床指标的研究有很多,但在我国不同地区人群研究结论不一致。叉头转录因子O1(Forkhead box O1,Fox O1)是一类重要的转录因子,属于Fox O家族成员之一。Fox O1主要受磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)调控,参与多种基因表达调节。研究显示Fox O1在胰岛素抵抗、胰岛β细胞增殖、分化和凋亡、糖脂代谢等与2型糖尿病发生发展的相关机制中发挥重要作用。目前关于Fox O1与糖尿病相关并发症的临床研究较少。已有基础研究表明,Fox O1调节抗氧化基因,在肾小球系膜细胞中,提高Fox O1表达水平,可通过改善细胞外基质堆积,调控自噬水平等参与DKD发生与发展。Fox O1可能作为DKD新的血清标志物。单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polumorphism,SNP)是人类可遗传变异中最常见的一种,占所有已知基因多态性的90%以上。SNP可通过影响和改变基因表达导致疾病的发生。目前,已发现Fox O1基因上的多态性位点有数千种,这些基因多态性位点对Fox O1的功能影响尚不完全清楚,文献报道的基因多态性位点对于糖尿病的作用也并不一致,Fox O1基因SNP与糖尿病肾脏疾病发生发展的相关性更是鲜有报道。综上,本研究旨在阐明2型糖尿病肾脏疾病发病的临床特征,血清Fox O1与糖尿病肾脏疾病的关系及Fox O1基因单核苷酸多态性与糖尿病肾脏疾病发病风险间的关系,为临床2型糖尿病肾脏疾病发病风险预测、早期诊断、个体化治疗及预后判断提供新靶点及分子生物学依据。第一部分2型糖尿病肾脏疾病临床危险因素分析目的:研究2型糖尿病的临床特征与2型糖尿病肾脏疾病发生的关系。方法:本研究包括138例2型糖尿病肾脏疾病(T2DKD组)和149例2型糖尿病(T2DM组)患者。收集患者临床数据,分析相关临床数据在T2DKD组和T2DM组组间是否存在统计学差异,利用logistic回归分析筛选2型糖尿病肾脏疾病可能的危险因素,评估2型糖尿病临床特征与其肾脏疾病发生的相关性。结果:1.性别、年龄在T2DKD组与T2DM组间无统计学差(P>0.05)。2.饮酒史、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)在T2DKD组与T2DM组间无统计学差异(P>0.05)。3.身体质量指数、吸烟史、糖尿病病程、高血压病史、收缩压、舒张压、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、尿酸(Uric acid,UA)、糖化血红蛋白(Hemoglobin A1c,Hb A1c)在T2DKD组与T2DM组间存在统计学差异(P<0.05)。4.Logistic回归分析显示吸烟、糖尿病病程、高血压病史、收缩压、Hb A1c、低HDL-C与2型糖尿病肾脏疾病发生相关(P<0.05),其OR(95%CI)分别为1.780(1.215-2.204)、1.431(1.101-1.880)、1.772(1.211-2.203)、1.035(1.008-1.065)、1.010(1.007-1.014)和1.675(1.099-2.010)。结论:吸烟、糖尿病病程、高血压病史、收缩压、HbA1c、低HDL-C是2型糖尿病肾脏疾病发生的独立危险因素。第二部分血清FoxO1与2型糖尿病肾脏疾病风险关系研究目的:研究血清Fox O1水平与2型糖尿病肾脏疾病发生的关系。方法:本研究包括138例T2DKD患者和149例T2DM患者。临床数据收集同第一部分,利用酶联免疫吸附技术(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测血清Fox O1水平,分析评估血清Fox O1水平与2型糖尿病肾脏疾病发生的相关性。结果:血清Fox O1水平在T2DKD组明显高于T2DM组,具有统计学差异(P<0.05),OR(95%CI)为1.010(1.008-1.015)。结论:血清Fox O1是2型糖尿病肾脏疾病发生的独立危险因素。第三部分FoxO1基因多态性与2型糖尿病肾脏疾病风险关系研究目的:研究Fox O1基因rs17446614和rs17592236单核苷酸多态性与2型糖尿病肾脏疾病发生的关系。方法:本研究纳入了138例T2DKD患者和149例T2DM患者。两组年龄、性别匹配,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)方法检测受试者Fox O1基因的单核苷酸多态性。采用Haploview软件分析Fox O1基因多态性的连锁不平衡和单倍型与T2DKD发病的相对风险关系,应用优势比(Odds ratios,OR)和95%置信区间(95%confidence interval,95%CI)评估Fox O1基因的rs17446614和rs17592236 SNP与T2DKD发生风险的相关性。应用Logistic回归分析校正患者临床特征,按性别分类进行亚组分析。结果:1.Fox O1基因rs17446614 AA基因型分布频率T2DKD组高于T2DM组,有统计学差异(P<0.05),AA基因型携带者发生糖尿病肾脏疾病的风险比GG基因型携带者增加4.412倍(OR=5.412,95%CI:1.013-26.559)。2.Fox O1基因rs17446614 A等位基因分布频率T2DKD组高于T2DM组,有统计学差异(P<0.05),A等位基因携带者发生糖尿病肾脏疾病的风险比G等位基因携带者高出0.680倍(OR=1.680,95%CI:1.060-2.662)。3.在女性中,rs17446614 AA基因型分布频率T2DKD组高于T2DM组,有统计学差异(P<0.05),女性AA基因型携带者发生糖尿病肾脏疾病的风险比GG基因型携带者增加7.7倍(OR=8.700,95%CI:1.008-75.062)。4.在女性中,rs17446614 A等位基因分布频率T2DKD组高于T2DM组,有统计学差异(P<0.05),女性A等位基因携带者发生糖尿病肾脏疾病的风险比G等位基因携带者高出1.003倍(OR=2.003,95%CI:1.070-3.749)。5.在男性中,Fox O1基因rs17446614所有基因型及等位基因分布频率T2DKD组与T2DM组无统计学差异(P>0.05)。6.Fox O1基因rs17592236所有基因型及等位基因分布频率在T2DKD组与T2DM组无统计学差异(P>0.05);两组不同性别间无统计学差异(P>0.05)。7.Fox O1基因rs17446614和rs17592236基因多态性存在连锁不平衡,A-C单倍型的分布频率在T2DKD组高于T2DM组,有统计学差异(P<0.05),A-C单倍型携带者发生糖尿病肾脏疾病的风险比G-C单倍型携带者高0.850倍(OR=1.850,95%CI:1.156-2.986)。结论:1.Fox O1基因rs17446614位点与2型糖尿病肾脏疾病的发病风险具有相关性,其AA基因型、A等位基因为2型糖尿病肾脏疾病易感因素。2.Fox O1基因rs17446614位点AA基因型和A等位基因是女性糖尿病肾脏疾病的易感因素。3.Fox O1基因rs17592236位点的基因多态性与糖尿病肾脏疾病发病风险无相关性。4.Fox O1基因rs17446614和rs17592236的A-C单倍型是糖尿病肾脏疾病的易感因素。