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目的了解乳腺肿瘤癌前病变组织微环境成纤维细胞对乳腺肿瘤发生、发展的影响，研究成纤维细胞在不典型增生组织中活化、累积及对乳腺癌细胞增殖、浸润的初步影响。方法收集临床正常乳腺组织、不典型增生组织、原位癌组织、浸润性乳腺癌组织；免疫组织化学染色法分析CAFs特异性标记蛋白α-SMA在乳腺病变组织中的表达差异；采用I型胶原酶法分离并培养AFs、CAFs和NFs；免疫荧光化学染色法检测FN表达以鉴定细胞纯度，α-SMA原代培养细胞中CAFs的累积和活化程度；MTT法比较AFs、NFs和CAFs细胞增殖能力；流式细胞法比较成纤维细胞细胞周期各期细胞的组成差异；Western Blot法比较AFs、NFs和CAFs细胞中周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的表达变化；用共培养体系检测NFs、AFs和CAFs对乳腺癌细胞细胞株MDA-MB-231生长、增殖及侵袭的影响。结果免疫组织化学染色显示α-SMA在正常乳腺、不典型增生、原位癌、浸润性乳腺癌组织中的表达平均值，分别为0.00±0.00、0.28±0.74、2.20±1.04和4.28±1.54，不典型增生中α-SMA表达比正常组织略有增强，远低于原位癌、浸润性乳腺癌组织；原代培养的各类成纤维细胞，经特异标志蛋白的免疫组织化学染色鉴定，分离得到的NFs、AFs、CAFs纯度大于95%，α-SMA荧光表达的定量分析结果显示AFs与NFs的强度比值为1.10，无显著差异（P>0.05），CAFs表达强度是NFs的2.66倍，是AFs的2.41倍，与AFs、NFs有显著差异（P<0.01）；NFs、AFs、CAFs的增殖能力依次增强（P<0.05）；NFs、AFs、CAFs细胞周期S期百分比分别为：8.24±2.47、16.94±4.77、33.31±7.90，三类成纤维细胞S期细胞比例依次增大（P<0.05）；与NFs相比，AFs周期蛋白cyclinD1表达增强（P<0.05），p21waf1和p53蛋白表达降低（P<0.05）；AFs的周期蛋白cyclin D1的表达与CAFs相比有明显降低（P<0.05），p21waf1蛋白和p53蛋白表达水平较CAFs强（P<0.05）；在共培养体系中，与单独培养的MDA-MB-231对照组细胞相比，AFs和CAFs促进乳癌细胞MDA-MB-231的增殖；MDA-MB-231单独培养组、 MDA-MB-231/AFs共培养组、MDA-MB-231/CAFs共培养组中，MDA-MB-231细胞细胞周期S期组成百分含量依次增大：27.81±1.28、30.06±0.41、32.41±0.35，差异显著（P<0.05），相反NFs抑制MDA-MB-231细胞的增殖和细胞周期S期组成的比例（21.20±0.7）（P<0.05）；与单独培养的MDA-MB-231细胞对比，AFs和CAFs对MDA-MB-231浸润能力的促进作用分别为1.44倍和3.25倍（P<0.05），而NFs导致MDA-MB-231的浸润能力下降到原来的0.66（P<0.05）。结论乳腺微环境中的成纤维细胞，在早期不典型增生阶段未出现活化，原位癌组织开始出现CAFs活化，浸润性癌组织活化明显。在原位癌向浸润性癌转变的过程中，微环境α-SMA表达增强，CAFs数量增多，呈明显的累积现象。不典型增生组织中AFs的生物学特性已发生改变，具有CAFs的一些特点；NFs对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和浸润具一定抑制作用，AFs、CAFs促进乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和浸润。我们的研究表明：在乳腺肿瘤的癌前病变组织，AFs可能是NFs向CAFs转变的中间过渡阶段。