β-桐酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡作用的研究

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共轭亚麻酸(Conjugated linolenic acid, CLnA)是十八碳三烯酸的一组位置和几何异构体,具有抑制肿瘤形成、增强机体免疫力和影响脂代谢等功能。p-桐酸(t9,t11,t13-CLnA)是共轭亚麻酸的常见异构体。目前关于p-桐酸对膀胱癌细胞T24的影响尚未见报道。本论文主要研究β-桐酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的作用,进一步对其作用机制进行初步探讨。应用MTT法,考察了p-桐酸对人膀胱癌细胞T24生长的影响,结果表明,在10gmol/L至80gmol/L的浓度范围内p-桐酸能够明显抑制人膀胱癌细胞T24的细胞活力,其作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。应用Hoechst33342荧光染色观察细胞核形态变化,发现β-桐酸处理T24细胞24h后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光。AV/PI双染色后应用流式细胞术分析发现,20μmol/L和40μmol/Lβ-桐酸能诱导人膀胱癌细胞T24凋亡,凋亡率分别达到空白对照组的2.3倍和5.2倍。同时,β-桐酸能够引起活性氧的积累和还原型谷胱甘肽的降低,p-桐酸处理后活性氧含量达到空白对照组的2.58倍;此外,应用蛋白免疫印迹分析,结果显示p-桐酸可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3(?)PPPARy蛋白表达;应用PPARy的抑制剂T0070907能够明显拮抗p-桐酸对T24细胞生长的抑制作用;进一步应用抗氧化剂NAC可以阻断p-桐酸对人膀胱癌细胞T24凋亡的诱导作用,增加Bcl-2/Bax的蛋白比例,降低Caspase-3的表达和细胞色素C的释放,并抑制其对PPARy表达的影响。综上所述p-桐酸能够显著诱导人膀胱癌细胞T24的凋亡。p-桐酸可能通过对活性氧的积累调节PPARy蛋白的表达,进一步影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达,从而发挥诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的作用。
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