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目的:非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)重要的并发症,已成为全世界最常见的慢性肝脏疾病。近期专家提出将非酒精性脂肪性肝病更名为代谢相关脂肪性肝病(Metabolic associated fatty liver disease,MAFLD),但对于MAFLD仍需要进一步的研究和描述。非酒精性脂肪性肝病的特征是肝细胞脂质积累和脂肪变性,其发病与胰岛素抵抗、氧化应激、内质网应激以及炎症有关。而自噬可以通过多种途径调节脂质代谢,胰岛素抵抗,减轻肝细胞脂肪变性、损伤和炎症。非酒精性脂肪性肝病的发生、发展和结局与自噬下调密切相关,因此上调自噬对预防和治疗非酒精性脂肪性肝病有着关键作用。钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂是一种治疗2型糖尿病的新型药物,通过抑制肾脏中葡萄糖重吸收并促进尿中葡萄糖排泄而降低血糖。近期临床研究证明,除持续降血糖作用之外,SGLT-2抑制剂还可以降低非酒精性脂肪性肝病体重指数和脂肪肝指数。然而,SGLT-2抑制剂对于非酒精性脂肪性肝病的作用及其机制研究尚未清楚。恩格列净是一种高效的、选择性SGLT-2抑制剂,其对非酒精性脂肪性肝病的研究报道甚少。因此,本研究在体外和体内探讨恩格列净是否改善2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病及其潜在机制。方法:选取6周龄的db/db小鼠作为2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病模型,适应性喂养2周,将其随机分成三组,每组6只,即糖尿病组(db/db组)、恩格列净治疗组(3.8mg/kg/d,db/db+Empa组)、胰岛素治疗组(db/db+Ins组)。同窝db/m小鼠6只作为正常对照组(db/m组)。对照组给予同体积生理盐水灌胃。干预8周,定期监测血糖、尿糖、体重。8周后留取血标本检测肝功能;通过H&E染色、油红O染色、免疫组化、Western Blotting检测小鼠肝脏组织形态学变化、脂质蓄积、自噬水平、TET2、AMPK、p-AMPK蛋白的表达。人正常肝细胞HL7702作为细胞模型(NC组),给予0.5mmol/L棕榈酸(PA)和25mmol/L高糖(HG)诱导作为体外实验模型(PA+HG组),恩格列净8μmmol/L干预48h(PA+HG+Empa组)。选用AMPK激活剂AICAR、AMPK抑制剂Compound C以及转染TET2 si RNA,进行油红O染色及半定量分析检测肝细胞脂质蓄积情况,Western Blotting、激光共聚焦显微镜检测AMPK、p-AMPK、自噬、TET2蛋白的表达。应用自噬抑制剂3-MA,通过油红O染色及半定量分析、Western Blotting检测肝细胞脂质蓄积情况和自噬水平。结果:1、小鼠一般情况显示:与db/m组相比,db/db组小鼠血糖、尿糖、体重、肝重、谷丙转氨酶和谷草转氨酶显著升高(P<0.05),db/db+Empa组上述指标均有改善(P<0.05)。2、H&E染色、油红O染色显示:与db/m组相比,db/db组肝小叶正常结构破坏,肝窦周围区域存在广泛的大泡脂肪变性和脂质积聚;db/db+Empa组肝脏组织病理结构明显改善,肝脂肪变性和脂质积聚明显减少。3、免疫组化、Western Blotting结果显示:与db/m组相比,db/db组自噬水平、p-AMPK、TET2表达明显降低(P<0.05);db/db+Empa组上述指标明显增加(P<0.05);db/db+Ins组自噬水平没有明显改变(P>0.05)。4、PA和HG、3-MA干预HL7702:与NC组相比,PA+HG组脂质蓄积增加,p-AMPK、TET2、自噬水平明显降低(P<0.05);PA+HG+Empa组脂质蓄积减少,p-AMPK、TET2、自噬水平明显增加(P<0.05)。3-MA干预阻断自噬后,脂质蓄积显著增加(P<0.05)。5、Compound C、AICAR干预:Compound C干预后,p-AMPK、TET2、自噬水平明显降低,脂质蓄积增加(P<0.05),逆转恩格列净治疗作用;AICAR干预后,p-AMPK、自噬水平、TET2明显增加,脂质蓄积减少(P<0.05),与恩格列净的治疗作用相同。6、转染TET2 si RNA:TET2表达明显降低,脂质蓄积增加,自噬水平明显降低(P<0.05),逆转恩格列净治疗作用。结论:1、恩格列净改善2型糖尿病小鼠肝脏脂肪变性。2、恩格列净增加2型糖尿病小鼠的肝脏自噬水平,并增加TET2和p-AMPK的表达。3、恩格列净通过上调肝细胞的自噬水平而减轻脂肪变性。4、恩格列净通过AMPK/TET2途径调控肝细胞自噬水平而发挥作用。